[发明专利]一种全封闭一体化试剂提取扩增方法

说明书

本发明提供了一种全封闭一体化试剂提取扩增方法，试剂提取扩增方法在试剂提取扩增装置中进行；试剂提取扩增装置包括提取仓、驱动机构和扩增管，提取仓包括按照样本流向依次分布的裂解机构、洗涤机构和洗脱机构；试剂提取扩增方法包括：步骤S1：将样本加入裂解机构，样本在裂解试剂中裂解，释放核酸；核酸跟磁性物质结合在一起；步骤S2：滑块向扩增管方向移动，隔断失效，磁性物质流入洗涤机构；磁性物质均匀扩散到洗涤液中；磁性物质上的杂质被洗掉，并转移到洗涤液中；步骤S3：滑块继续移动，隔断失效，磁性物质流入洗脱机构；磁性物质均匀扩散到洗脱液中；磁性物质上的核酸被洗掉，并转移到洗脱液中；步骤S4：带有核酸的洗脱液流入扩增管，并在扩增管内进行PCR扩增。

技术领域

本发明涉及一种全封闭一体化试剂提取扩增方法。

背景技术

以PCR技术为基础的核酸诊断分析方法是分子诊断中的核心技术。将核酸自动提取过程与PCR扩增检测过程相互集成，构建一体化的核酸提取与扩增检测系统，对于进一步提高核酸诊断分析效率，实现整个核酸诊断分析过程的自动化具有重要的现实意义。

中国专利201120449250.5公开了一种核酸扩增与检测反应管，包括相互配合管体和管盖，管体包括位于上方的储液区以及位于下方的核酸扩增区，在核酸扩增区完成反应及荧光信号采集等实时检测手段；管盖内部设有中空凹槽，且核酸扩增区的容积分别小于或等于储液区的容积和中空凹槽的容积。

中国专利201521043284.9公开了一种等温核酸扩增装置及实验方法，包括平板原位核酸扩增芯片，该芯片由相互贴合、可滑动的上、下层载体构成，上、下层载体为同等大小的长方形，当下层固定时，上层载体可相对摩擦滑动。在下层载体的上贴合面上开设各种开口向下的凹槽流道、微腔，在上层载体的下贴合面上开设各种开口向上的凹槽流孔、微腔，以及一些进、出口通孔。

中国专利201620284715.9公开了一种多功能核酸扩增仪，包括控制系统、开关电源、上位机、加热循环系统和样本模块，控制系统连接开关电源、上位机和加热循环系统，加热循环系统的上方连接样本模块，样本模块上设有0.2mL的384孔板、96孔板、48孔板和1.5mL的12孔板。

中国专利申请201710163203.6公开了一体化核酸提取与扩增检测系统，该系统包括一次性微流控芯片及配套检测装置。其中微流控芯片包括反应单元和废液存储单元，芯片工作时，借助振动模块实现反应试剂之间、反应试剂与磁珠之间的相互混合，依靠磁珠驱动模块，依次完成核酸吸附、纯化等步骤；通过流体驱动模块让PCR扩增试剂冲洗磁珠，洗脱磁珠上的扩增模板，进入由垂直通道构建的对流PCR反应器中，通过加热模块及荧光采集模块实现PCR扩增反应和检测。

上述技术方案的缺陷在于：

1、结构复杂，需要真空泵；而裂解液比较粘稠，真空泵运行容易产生气泡，影响提取；

2、废液会经过核酸扩增检测腔，有废液残留污染，影响核酸扩增检测；

3、检测过程不封闭，导致检测装置外的环境与检测装置内的试剂接触，致使两者存在交叉污染的风险；

4、检测过程繁琐，多个环节需要增加手工操作；

5、检测时间长。

因此，如何提供一种没有真空泵，仪器设备结构更简单；不产生气泡，有利于提取顺利进行，得到纯度更高的核酸；具有单独的核酸扩增检测腔，没有废液残留影响；检测过程封闭、可有效避免外部环境与检测试剂交叉污染的试剂提取扩增方法成为了业界需要解决的问题。

发明内容

针对现有技术的缺点，本发明的目的是提供一种全封闭一体化试剂提取扩增方法，其结构简单，高效准确，检测过程封闭、可有效避免外部环境与检测试剂交叉污染。