[发明专利]一种用于诊断脑梗塞的肠道菌群试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及临床医疗领域，尤其涉及一种用于诊断脑梗塞的肠道菌群试剂盒及其应用：第一试剂为基因序列为5’‑AGAGTTTGATCATGGCTC‑3’和5’‑CCGTCAATTCCTTTGAGTTT‑3’的水溶引物；第二试剂为pGEM‑T easy载体质粒，通过对代谢标本的PCR扩增，载体质粒pGEM‑T easy及转入DH5α感受态细胞，通过探索脑梗塞患者肠道菌群结构，可为其诊断提供新依据，并为预防提供可能的指征，具有较大的社会意义和经济效益。

技术领域

本发明涉及临床医疗领域，尤其涉及一种用于诊断脑梗塞的肠道菌群试剂盒及其应用。

背景技术

脑梗塞又称急性缺血性脑卒中(Cerebral Ischemia，CI)，是老年人中比较常见的疾病，严重的影响患者的生存质量。近年来，由于个人生活习惯不合理或者个人生活的环境因素使得脑血管首次发病者年龄逐渐年轻化。脑血管病目前已成为中国第一大致残和第二大致死疾病。尽管近年来脑梗死的治疗水平得到了很大提高，但大部分患者的治疗效果仍不理想，死亡率与致残率均较高、预后较差。因此，探索脑梗死发病机制并预防被认为是控制脑梗死最经济有效的方法。

在过去的几年内，复杂的肠道微生物生态系统已经被广泛的研究。我们认为，饮食结构会影响肠道菌群，反之，肠道菌群结构的改变也会影响人体代谢，而代谢的改变已经被认为是脑梗死的潜在原因之一。目前尚未存在一种通过代谢产物诊断脑梗塞的肠道菌群试剂盒。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中存在的不足，提供一种用于诊断脑梗塞的肠道菌群试剂盒及其应用。

1.一种用于诊断脑梗塞的肠道菌群试剂盒，其特征在于，包括依次设置的如下试剂：

第一试剂为基因序列为5’-AGAGTTTGATCATGGCTC-3’和5’-CCGTCAATTCCTTTGAGTTT-3’的水溶引物；

第二试剂为pGEM-T easy载体质粒。

2.一种用于诊断脑梗塞的肠道菌群试剂盒应用，其特征在于：

a.将粪便标本的基因组DNA为模板，加入第一试剂为基因序列为5’-AGAGTTTGATCATGGCTC-3’和5’-CCGTCAATTCCTTTGAGTTT-3’的水溶引物中，以High-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer和高效高保真酶进行PCR扩增；

b.将PCR产物加入第二试剂载体质粒pGEM-T easy，使其连接，转染；

c.将连接，转染后产物，转入DH5α感受态细胞，并进行测序，测序结果使用GenBank的BLAST和RDP数据库进行比对,得到各微生物相对丰度，进行分析。

本发明的有益效果是：

通过对代谢标本的PCR扩增，载体质粒pGEM-T easy及转入DH5α感受态细胞，分析各微生物相对丰度，并且通过探索脑梗塞患者肠道菌群结构，发现脑梗塞患者与健康志愿者肠道菌群结构相似度较低，脑缺血与健康组肠道菌群结构相似度较高，可能与脑梗塞进程有关，并为脑梗塞患者的诊断与分层以及发病机制提供新的依据。通过寻找脑梗塞患者的特征性肠道菌群，可为其诊断提供新依据，并为预防提供可能的指征，具有较大的社会意义和经济效益。

具体实施方式

为了使本技术领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合最佳实施例对本发明作进一步的详细说明。

所示，本发明一种用于诊断脑梗塞的肠道菌群试剂盒，其特征在于，包括依次设置的如下试剂：

第一试剂为基因序列为5’-AGAGTTTGATCATGGCTC-3’和5’-CCGTCAATTCCTTTGAGTTT-3’的水溶引物；