[发明专利]一种检测食品中十七种氨基酸的方法

说明书

本发明属于食品检测技术领域，公开了一种检测食品中十七种氨基酸的方法，包括以下步骤：步骤一，将样品用粉碎机粉碎混匀，密封冷冻(‑20℃)保存；步骤二，称取含蛋白7.5‑25mg的样品于20mL厌氧水解管中；步骤三，加入10mL HCL溶液(6moL/L)，将样品全部浸没，充高纯氮气1min‑2min，旋紧密封盖；步骤四，将水解管置于(110±5)℃恒温烘箱中水解22h，水解完成后，冷却、混匀，样液经0.22μm滤膜过滤；步骤五，试样液经LC‑MS/MS分析，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。本发明使用LC‑MS/MS、外标峰面积法定量，可有效的检测出食品中十七种氨基酸，操作简单，实用性强。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，尤其涉及一种检测食品中十七种氨基酸的方法。

背景技术

氨基酸是构成动物营养所需蛋白质的基本物质，是含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称，不仅具有营养保健价值，还有句生理调节的功效。天然的氨基酸现已经发现的有300多种，其中人体所需的氨基酸约有22种，分非必需氨基酸和必需氨基酸(人体无法自身合成)。另有酸性、碱性、中性、杂环分类，是根据其化学性质分类的。各种氨基酸在生物体中具有不同的生物功能，如生物体中的色氨酸与脑的正常代谢有密切的关系，L-半胱氨酸能增强生物体的抗病能力，因此，准确灵敏地测定食物、药品和生物样品中氨基酸的含量具有十分重要的意义。在食品工业中，氨基酸是食品品质鉴定中的一个重要的理化指标。各种食品中都含有游离氨基酸，在食品的加工过程中，可以与肽、核苷酸、有机酸、糖、无机离子等形成相应的呈味活性物质，决定了每一种食物独有的风味特征。目前食品中氨基酸的种类测定方法中，利用氨基酸分析仪只能测定食物中16种氨基酸的含量，并且氨基酸自动分析仪专一性强，价格昂贵，普及性不强，检测氨基酸的种类少，远远不能满足实际工作的需要，开发出多种氨基酸的检测方法是亟待解决的问题。

综上所述，现有技术存在的问题是：

目前食品中氨基酸的种类测定方法中，有氨基酸分析仪法和柱前衍生高效液相色谱法，氨基酸自动分析仪专一性强，价格昂贵，普及性不强，柱前衍生法需要衍生试剂，且衍生过程控制较复杂，结果重现性不好，远远不能满足实际工作的需要。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种检测食品中十七种氨基酸的方法。

本发明是这样实现的，一种液相色谱-串联质谱法检测食品中十七种氨基酸的方法包括以下步骤：

步骤一，将样品用粉碎机粉碎混匀，密封冷冻(-20℃)保存；

步骤二，称取含蛋白7.5-25mg的样品于20mL厌氧水解管中；

步骤三，加入10mL HCL溶液(6moL/L)，将样品全部浸没，充高纯氮气1min-2min，旋紧密封盖；

步骤四，将水解管置于(110±5)℃恒温烘箱中水解22h，水解完成后，冷却、混匀，样液经0.22μm滤膜过滤；

步骤五，试样液经LC-MS/MS分析，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

进一步，所述步骤三充高纯氮气后注意保持水解管竖直，移开氮气后立即盖好软塞。

本发明另一目的在于提供一种利用所述液相色谱-串联质谱法测定十七种氨基酸的方法的测定系统。

本发明的优点及积极效果为：

本发明使用LC-MS/MS、外标峰面积法定量，可有效的检测出食品中十七种氨基酸，操作简单，实用性强。加入盐酸溶液将样品中的蛋白质水解为游离氨基酸，充氮气是为了水解彻底，防止样品损失；与柱前衍生高兴液相色谱法相比，实验过程相对简单可控，无需衍生试剂，节省实验步骤与成本，实验结果更可靠。

附图说明