[发明专利]一种小球藻保存方法

说明书

本发明公开了一种小球藻保存方法，包括：1培养，将小球藻接种于培养液中封闭培养至对数生长期待用；2浓缩，离心小球藻藻液得浓缩液，然后置于微波炉中干燥至恒重得干燥藻粉；3保存，将干燥藻粉与蒸馏水置于细胞培养瓶中，然后添加甘油、茶叶提取物、芦荟提取物，用锡箔纸完全包裹住细胞培养瓶保存。有益效果为：本方法操作简单，有效保存介质金花茶叶提取物与芦荟提取物的纯度与含量较高，具有较高的生物学活性，使得小球藻能够保持完整的细胞结构、高成活率，复活后其生物量、叶绿素及活性多糖等重要指标无显著下降，是一种长时效、活性高、可持续的小球藻保存方法。

技术领域

本发明涉及藻类保存领域，尤其是涉及一种小球藻保存方法。

技术背景

小球藻（Chlorella vulgaris）绿藻纲，小球藻科。单细胞藻，常单生，也有多细胞聚集。细胞球形、椭圆形，内有一个周生、杯状或片状的色素体。无性繁殖，每个细胞可以产生2、4、8或16个似亲孢子，成熟时母细胞破裂，孢子逸出，长大后即为新个体。世界各地均有分布，多生活于较小浅水，也有海产种类。天然条件下个体较少，人工培养大量繁殖。细胞内的蛋白质、脂肪和碳水化合物含量都很高，又有多种维生素，可食用和作为饵料。

在工业方面，日本很早就开始了对小球藻的研发，成功制作小球藻提取液CGF为食品添加剂，因其具有食品添加剂所特有的优点，被快速运用到许多食品中。而在发酵工业也利用小球藻的发酵作用使有利微生物快速繁殖。并且，在水产养殖方面，小球藻还可作为鱼、虾、蟹以及贝类等的饲料，具有良好的投喂效果。随着低温生物学的快速发展，低温保存技术在医学、食品工业及农业上尤其是微生物保存、精子冷冻等多方面均有了广泛的应用。海洋微藻营养丰富，含有大量的蛋白质、多糖、不饱和脂肪酸、多种维生素等营养物质，被广泛的应用于水产养殖，但微藻自身的生长易受环境、气候等因素的影响，往往会给水产养殖业带来很大的不便，故而研究开发低温生物学在微藻中的应用也越来越受到重视。目前，缺乏一种保存效果好的小球藻保存方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种小球藻保存方法，本方法操作简单，有效保存介质金花茶叶提取物与芦荟提取物的纯度与含量较高，具有较高的生物学活性，使得小球藻能够保持完整的细胞结构、高成活率，复活后其生物量、叶绿素及活性多糖等重要指标无显著下降，是一种长时效、活性高、可持续的小球藻保存方法。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：

一种小球藻保存方法，包括：培养、浓缩、保存，具体包括以下步骤：

培养：将小球藻接种于培养液中封闭培养，培养光照周期为10～12L:12～14D、温度为20～22℃，接种后及加水扩种后施用无机肥碳酸氢铵与过磷酸钙的质量比为3～4:1，按照每平方米水面泼洒25～35g全池均匀泼洒，每天施肥1次，每天监测试验池的藻细胞密度和水化学指标，将微藻培养至对数生长期，待用；在适宜培养条件下培养微藻菌种，能够促进微藻菌种健康的生长与繁殖，培养至对数生长期后进行浓缩保存有利于保持小球藻较为旺盛的生命力，易于提高其活性与成活率；

浓缩：取对数期小球藻藻液，在500～800r/min转速离心15～35min，去除上清液得小球藻浓缩液，然后置于微波炉中，将微波炉功率调节至最大功率的20～30%，干燥至恒重，得到微波干燥藻粉；使用微波炉干燥小球藻藻液，可以较高效率的实现脱水干燥，使小球藻保持在对数生长期的旺盛生命状态，同时还可以降低处理时间，节约能源；