[发明专利]一种小球藻保存方法

权利要求书

1.一种小球藻保存方法，其特征在于：包括：

培养：将小球藻接种于培养液中封闭培养，接种后及加水扩种后施用无机肥碳酸氢铵与过磷酸钙，每天监测试验池的藻细胞密度和水化学指标，将微藻培养至对数生长期，待用；

浓缩：取对数期小球藻藻液，离心去除上清液得小球藻浓缩液，然后置于微波炉中干燥至恒重，得到微波干燥藻粉；

保存：将干燥藻粉与蒸馏水置于细胞培养瓶中，然后添加甘油、茶叶提取物、芦荟提取物，用锡箔纸完全包裹住细胞培养瓶保存。

2.根据权利要求1所述的一种小球藻保存方法，其特征在于：所述培养步骤中，培养液为NaNO₃78～80mg/L、NaH₂PO₄·H₂O3～4mg/L、Na₂SiO₃·9H₂O22～25mg/L、Na₂EDTA4.36～4.4mg/L、FeCl₃·6H₂O3.16～3.2mg/L、CuSO₄·5H₂O0.01～0.015mg/L、ZnSO₄·7H₂O0.023～0.025mg/L、CoCL₂·6H₂O0.012～0.015mg/L、MnCL·4H₂O0.18～0.2mg/L、Na₂MoO₄·2H₂O0.07～0.08mg/L、维生素B1 0.1～0.12μg/L、维生素B12 0.5～0.6μg/L、生物素0.8～1μg/L，余量为无菌室，在121℃下灭菌20min。

3.根据权利要求1所述的一种小球藻保存方法，其特征在于：所述培养步骤中，培养光照周期为10～12L:12～14D，温度为20～22℃。

4.根据权利要求1所述的一种小球藻保存方法，其特征在于：所述培养步骤中，培养期间主要水化学指标为：水温为10.0～12.5℃，盐度为19～21，pH为8.55～9.33，溶解氧为15.2～20.0mg/L，氨态氮为24.29～70.95mg/L，活性磷为0.71～2.37mg/L，透明度为11～18cm。

5.根据权利要求1所述的一种小球藻保存方法，其特征在于：所述保存步骤中，甘油的质量分数为0.5～0.8%，金花茶提取物的质量分数为1.2～1.5%，芦荟提取物的质量分数为5.5～6.0%。

6.根据权利要求1或5所述的一种小球藻保存方法，其特征在于：所述保存步骤中，金花茶提取物的制备方法为：将金花茶叶粉以乙醇溶液渗滤提取得浸膏，将浸膏置于含有0.85～0.88‰2,2-二苯基环戊醇的正丁醇溶剂中萃取，萃取物即为金花茶叶正丁醇提取物，经真空干燥制成浸膏待用。

7.根据权利要求1或5所述的一种小球藻保存方法，其特征在于：所述保存步骤中，芦荟提取物的制备方法为：将芦荟药材研磨成微小颗粒，置于容器中，加入去离子水、复合酶、戊二醇与t-亮氨酸叔丁酯酶解，酶解液过0.35～0.45μm的滤膜过滤，取滤液干燥至相对密度为1.05～1.08即得芦荟提取液。

8.根据权利要求7所述的一种小球藻保存方法，其特征在于：所述芦荟提取物的制备方法中，酶解pH为7.4～7.6，酶解温度为42～45℃，酶解时间为25～45min。

9.根据权利要求7所述的一种小球藻保存方法，其特征在于：所述芦荟提取物的制备方法中，复合酶的添加量为芦荟药材重量的3～12%，戊二醇的添加量为复合酶重量的15～18‰，t-亮氨酸叔丁酯的添加量为复合酶重量的3～3.6‰，复合酶为重量比为1:3～5的胰蛋白酶与木瓜蛋白酶。

10.根据权利要求1所述的一种小球藻保存方法，其特征在于：所述保存步骤中，细胞培养瓶置于1～2℃、无菌、充氧、黑暗环境中保存。