[发明专利]一种热稳定性改良的低温外切菊粉酶突变体Mut8S有效
| 申请号： | 201810597684.6 | 申请日： | 2018-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN108504644B | 公开（公告）日： | 2019-06-28 |
| 发明（设计）人： | 周峻沛;黄遵锡;张蕊;何丽梅;韩楠玉;丁俊美;许波;唐湘华 | 申请（专利权）人： | 云南师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24;C12N15/56;C12N15/70 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 夏艳 |
| 地址： | 650500 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 突变体 外切菊粉酶 热稳定性 改良 酶活 氨基酸序列 蛋白质改造 基因工程 生物能源 可水解 最适pH 果糖 菊粉 酿酒 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种热稳定性改良的低温外切菊粉酶突变体Mut8S，其特征在于，所述的突变体Mut8S的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.权利要求1所述的突变体Mut8S的编码基因，其特征在于，所述的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.包含权利要求2所述的编码基因的重组载体。
4.包含权利要求2所述的编码基因的重组菌。
5.权利要求1所述的热稳定性改良的低温外切菊粉酶突变体Mut8S的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)在Mut8S编码基因的5'端补加HRV3C蛋白酶酶切位点编码序列；
2)将1)中的序列与表达载体pET-28a(+)相连接，并将连接产物转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得包含Mut8S编码基因的重组菌株；
3)培养重组菌株，诱导重组外切菊粉酶突变体Mut8S表达；
4)回收并纯化所表达的重组外切菊粉酶突变体Mut8S；
5)用HRV3C蛋白酶酶切重组外切菊粉酶突变体Mut8S；
6)回收并纯化外切菊粉酶突变体Mut8S；
7)活性测定。
6.权利要求1所述的突变体Mut8S在食品或酿酒制备中的应用。
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