[发明专利]检测副溶血性弧菌的RPA引物、探针、试剂盒和方法在审
| 申请号： | 201810587684.8 | 申请日： | 2018-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN109680079A | 公开（公告）日： | 2019-04-26 |
| 发明（设计）人： | 刘小青;陈晶;黄建飞;陈国培;王珍妮;刘斌;谢光宗;林振润;杨国武;盛司潼;张晓英 | 申请（专利权）人： | 深圳市计量质量检测研究院（国家高新技术计量站;国家数字电子产品质量监督检验中心）;深圳华因康基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518000 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 副溶血性弧菌 试剂盒 引物 检测 探针 菌核 食品安全监测 疾病监测 快速检测 临床诊断 上游引物 下游引物 溶血性 基因 应用 | ||
1.一种检测副溶血性弧菌的RPA引物，其特征在于，针对
上游引物Seq ID No.1: 5’- CGCCAAACTACATCGGAAAACATGGCCCCATC -3’和下游引物Seq ID No.2：5’- CTAGAAAAAACTCCCCTTGTTCTGGGTGCGAG -3’。
2.如权利要求1所述的检测副溶血性弧菌的RPA引物，其特征在于，所述下游引物SeqID No.2在5’端进行biotin修饰。
3.一种检测副溶血性弧菌的RPA引物，其特征在于，采用权利要求1或2所述的引物中的上游引物、下游引物中的至少一种，或选自权利要求1或2所述的引物中的上游引物、下游引物序列或上游引物、下游引物序列的互补链序列中单条序列同源性为50%及以上的碱基序列。
4.一种检测副溶血性弧菌的RPA探针，其特征在于，针对
所述探针序列Seq ID No.3的5’端31bp的位置处采用dSpacer 修饰，dSpacer分子两侧的胸腺嘧啶分别被荧光基团和淬灭基团取代，所述探针序列Seq ID No.3的3’末端通过阻塞基团C3Spacer或磷酸化进行修饰。
5.如权利要求4所述的检测副溶血性弧菌的RPA探针，其特征在于，所述荧光基因采用FAM-dT荧光标记基团，所述淬灭基团采用BHQ1-dT荧光标记基团。
6.一种检测副溶血性弧菌的RPA探针，其特征在于，针对
7.一种检测副溶血性弧菌的RPA探针，其特征在于，采用权利要求4或6所述的探针序列或其互补链序列中单条序列同源性为50%及以上的碱基序列。
8.一种检测副溶血性弧菌的RPA试剂盒，其特征在于，包括含有如权利要求1所述的引物和如权利要求4或6所述的探针以冻干粉形式的RPA反应组分、RPA反应缓冲液。
9.一种检测副溶血性弧菌的RPA方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）提取待测样品基因组DNA；
（2）采用权利要求8所述的试剂盒、步骤(1)提取的待测样品基因组DNA以及醋酸镁，配制成RPA反应体系；
（3）将步骤（2）配置的反应体系在恒温下进行扩增反应，整个反应过程收集荧光信号；
（4）根据扩增反应结果确定待测样品基因组DNA中是否含有副溶血性弧菌。
10.如权利要求9所述的检测副溶血性弧菌的RPA方法，其特征在于，所述步骤（2）中的RPA反应体系以50uL计为：
。
11.如权利要求10所述的检测副溶血性弧菌的RPA方法，其特征在于，所述RPA反应体系的反应恒温条件为37 ℃-42℃，反应时间为15-20分钟。
12.如权利要求10所述的检测副溶血性弧菌的RPA方法，其特征在于，所述RPA反应体系进一步包括阳性质控品和阴性质控品。
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