[发明专利]一种检测猪非典型瘟病毒的荧光定量RT-PCR引物和探针及方法与应用有效
| 申请号： | 201810581493.0 | 申请日： | 2018-06-07 |
| 公开（公告）号： | CN108611442B | 公开（公告）日： | 2021-09-24 |
| 发明（设计）人： | 张斌;周可磊;岳华;汤承;王远微 | 申请（专利权）人： | 西南民族大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都天汇致远知识产权代理事务所(普通合伙) 51264 | 代理人： | 韩晓银 |
| 地址： | 610041 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 非典型 瘟病 荧光 定量 rt pcr 引物 探针 方法 应用 | ||
1.一种检测猪非典型瘟病毒的荧光定量RT-PCR引物和探针，其特征在于，包括上游引物APPV F、下游引物APPV R以及探针APPV Probe，其中，上游引物APPV F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物APPV R的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，探针APPV Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
2.一种非诊断目的地检测猪非典型瘟病毒的荧光定量RT-PCR的方法，其特征在于，包括以下步骤：
提取待检测样品的RNA，以待检测样品的RNA为模板，反转录得到cDNA，用权利要求 1中所述的引物和探针对cDNA进行荧光定量RT-PCR扩增；通过实时荧光定量PCR仪进行结果的读取，判断S型扩增曲线和CT值，在扩增曲线正常的情况下，若CT值＞0时，则可记为阳性，若CT值= 0时，则记为阴性。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述反转录的步骤为：将RNA模板4 µL、1号5×Prime Script Buffer 4 µL、2号Prime ScriptRT Enzyme Mix 1 μL、4号Random 6mers 2 µL和5号RNase Free dH2O 9 μL混匀，放入PCR仪上进行反转录。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述荧光定量RT-PCR的反应检测体系为：Premix Ex Taq10 μL，上游引物APPV F、下游引物APPV R各0.5 μL，探针APPV Probe 0.8 μL，cDNA模板100 ng，用ddH2O补齐到20 μL。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的荧光定量RT-PCR反应条件为： 95℃预变性2 min；PCR: 95℃反应15 sec，54℃反应20 sec进行40个循环。
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