[发明专利]一种鸡伴性浅芦花羽基因的鉴定引物及试剂盒、鉴定方法及应用

权利要求书

1.一种鸡伴性浅芦花羽基因的鉴定引物，其特征在于：其核苷酸序列如下所示：

上游引物 5‘-TGACCTCTCGGATAAGGTGCACGGTC-3’；

下游引物 5‘-CTCCTTCTCAGAACCCGGC-3’；

将所述上游引物第23位的模板序列C改变为G，与未发生突变形成限制性内切酶Asu I的识别序列GGTCC；上述引物的PCR产物为154bp，如果SEQ ID NO.1所示序列的第27位未发生突变碱基为C，则PCR产物能够被Asu I酶切开，其中Asu I识别位点为GGNCC，PCR产物能够被切割成23bp和131bp的片段；如果SEQ ID NO.1所示序列的第27位发生了突变碱基为T，则PCR产物不能够被Asu I酶切开，产物大小为154bp；未发生突变时碱基为C时，鸡的羽色表现为非浅芦花羽，突变为T时，鸡的羽色表现为浅芦花羽，并且这个基因位于Z染色体上，呈现为伴性遗传。

2.一种鸡伴性浅芦花羽基因的鉴定试剂盒，其特征在于：包含如权利要求1所述的鉴定引物。

3.根据权利要求2所述的鉴定试剂盒，其特征在于：还包括DNA内切酶，所述DNA内切酶为Asu I酶。

4.一种鸡伴性浅芦花羽基因的鉴定方法，其特征在于：以待测鸡基因组DNA为模板，使用如权利要求1所述的鉴定引物进行PCR扩增，使用DNA内切酶酶切PCR扩增产物以检测如SEQ ID NO.1所示序列的第27位是否由C突变T，根据酶切结果判断待测鸡的浅芦花羽基因型。

5.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于：所述DNA内切酶为Asu I酶；如果待测鸡的基因组DNA的SEQ ID NO.1所示序列的第27位未发生突变，碱基为C，则与上游引物末端形成Asu I酶的识别序列GGTCC，所得的PCR扩增产物能被Asu I酶切开，形成131bp和23bp两条片段；如果SEQ ID NO.1所示序列的第27位发生突变，碱基为T，则所得PCR扩增产物不能被Asu I酶切开。

6.根据权利要求5所述的鉴定方法，其特征在于：如酶切产物仅为大小为154bp的片段，则待测鸡为HH基因型；如酶切产物为大小为154bp、131bp和23bp的三条片段，则待测鸡为Hh基因型；如酶切产物为大小为131bp和23bp的两条片段，则待测鸡为hh基因型。

7.根据权利要求6所述的鉴定方法，其特征在于：所述HH基因型为Z^HZ^H基因型或Z^HW基因型；所述Hh基因型为Z^HZ^h基因型；所述hh基因型为Z^hZ^h基因型或Z^hW基因型。

8.根据权利要求7所述的鉴定方法，其特征在于：若待测鸡的基因型为HH纯合型或Hh杂合型任意一种，则所述待测鸡为浅芦花羽鸡；若待测鸡的基因型为hh纯合型，则所述待测鸡不是浅芦花羽鸡。

9.如权利要求1所述的鉴定引物、权利要求2-3任一项所述的鉴定试剂盒或权利要求4-8任一项所述的鉴定方法在鸡浅芦花羽性状育种中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：选择HH基因型的鸡只，弃去Hh基因型和hh基因型的鸡只，以快速的培育出遗传性状稳定的浅芦花羽鸡群体。