[发明专利]鹧鸪早期性别PCR鉴定试剂盒、应用及方法

说明书

本发明涉及一种鹧鸪早期性别PCR鉴定试剂盒及应用，以及利用该试剂盒对鹧鸪进行早期性别鉴定的方法。所述试剂盒主要包括PCR扩增引物和PCR反应试剂，所述PCR扩增引物序列如下：上游引物：5'‑GTTACTGATTCGTCTACGAGA‑3'下游引物：5'‑ATTGAAATGATCCAGTGCTTG‑3'。本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了通过分子手段对鹧鸪进行早期性别鉴定的途径，与其他方法如翻肛鉴别、腹腔镜检、粪便类固醇检测及核型相比，具有准确性高、操作简便、成本低、对动物伤害小等优点，对推动鹧鸪良种选育和产业化具有十分重要的意义。

(一)技术领域

本发明涉及一种鹧鸪早期性别PCR鉴定试剂盒及应用，以及利用该试剂盒对鹧鸪进行早期性别鉴定的方法。

(二)背景技术

鹧鸪(Francolinus pintadeanus)又称石鸡，隶属于鸟纲、鸡形目、雉科、鹧鸪属。目前市场上人工养殖的鹧鸪都是美国鹧鸪，具有生长快，繁殖力强，肉厚骨细，味道鲜美，营养丰富，含脂肪少等特点，且有壮阳补肾、化痰下气等药性作用，被视为珍禽野味。已与鹌鹑、火鸡、鸵鸟一同成为我国特禽养殖生产的重要的组成部分。鹧鸪是一种单态性鸟，其雌雄外貌形态差别甚微，不像家鸡、山鸡等其他禽类从外形上可以区分开。

因此有必要研究一种利用分子手段对鹧鸪进行性别鉴定的方法。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种鹧鸪早期性别PCR鉴定试剂盒及应用，以及利用该试剂盒对鹧鸪进行早期性别鉴定的方法，采用分子手段对鹧鸪进行性别鉴定。

本发明采用的技术方案是：

一种鹧鸪早期性别PCR鉴定试剂盒，主要包括PCR扩增引物和PCR反应试剂，所述PCR扩增引物序列如下：

上游引物：5'-GTTACTGATTCGTCTACGAGA-3'

下游引物：5'-ATTGAAATGATCCAGTGCTTG-3'。

本发明试剂盒关键在于引物序列的选定，PCR试剂可采用本领域常规试剂。

本发明利用CHD基因的特异引物对鹧鸪的染色体解螺旋蛋白DNA结合基因基因(chromo-helicase-DNA binding gene,CHD)上的同源序列进行特异性扩增，从而对鹧鸪的性别进行了鉴定，获得了较好的结果。

鸟类的CHD基因位于性染色体Z和W上，其在鹧鸪等鸟类的两条性染色体上内含子的长度不同，导致该基因在两条性染色体上的长度不同，也证明了CHD基因用于雌雄的判定较为准确。因此，根据CHD基因内含子在Z和W染色体上不同，设计出特定的DNA分子扩增引物，扩增该基因的不同长度片段，成为了本发明鹧鸪性别鉴定的理论依据。

本发明还涉及所述试剂盒在鹧鸪早期性别鉴定中的应用。

本发明还涉及利用所述试剂盒对鹧鸪进行早期性别鉴定的方法，所述方法包括：

(1)提取初生鹧鸪羽毛DNA；

(2)以提取获得的DNA为模板，采用PCR扩增引物进行PCR扩增；

所述PCR扩增引物序列如下：

上游引物：5'-GTTACTGATTCGTCTACGAGA-3'；

下游引物：5'-ATTGAAATGATCCAGTGCTTG-3'；

(3)PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，若仅扩增获得1条566bp的特异性条带，则判断为雄性鹧鸪；若扩增获得566bp和416bp的2条特异性条带，则判断为雌性鹧鸪。

PCR反应程序如下：98℃预变性2min；98℃变性10S，53.1℃退火30S，72℃延伸30S，共30个循环；72℃延伸2min；4℃保存。