[发明专利]体外感染猪圆环病毒2型建立猪肺泡巨噬细胞炎症模型的方法

权利要求书

1.一种体外感染猪圆环病毒2型建立猪肺泡巨噬细胞炎症模型的方法，其特征在于：采用猪圆环病毒2型体外感染猪肺泡巨噬细胞系3D4/2细胞。

2.根据权利要求1所述的体外感染猪圆环病毒2型建立猪肺泡巨噬细胞炎症模型的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)3D4/2细胞经复苏传代后，细胞计数仪计数活细胞数＞95％，调整细胞浓度备用；

(2)设置细胞对照组和不同浓度PCV2病毒感染组，加入DMEM培养液及相应浓度病毒液，与细胞吸附2h后弃液，加入1mL含5％FBS的DMEM培养液后继续培养，分别于第4、8、12、24、48h收样，用于细胞活性及与细胞分泌炎性相关因子指标的测定。

3.根据权利要求1所述的体外感染猪圆环病毒2型建立猪肺泡巨噬细胞炎症模型的方法，其特征在于步骤(1)按以下操作进行：3D4/2细胞复苏后，用含10％-FBS-DMEM培养液转入瓶中，于37℃、5％CO₂培养箱中培养，待细胞长至70％-80％时进行传代，传代时用0.25％胰酶消化后以1∶2或者1∶3的比例进行传代培养，细胞计数仪计数活细胞数＞95％，调整细胞浓度为1×10⁶cell/mL备用。

4.根据权利要求1所述的体外感染猪圆环病毒2型建立猪肺泡巨噬细胞炎症模型的方法，其特征在于步骤(2)按以下操作进行：分别设置细胞对照组和4个不同浓度PCV2病毒感染组，每组4个重复，按1000μL/孔加至24孔板内，培养过夜使细胞贴壁后弃去培养液，PBS缓冲液洗2次，细胞对照组加入无血清DMEM培养液500μL，病毒组加入等量用不含血清的DMEM培养液稀释的不同浓度病毒液，37℃、5％CO₂培养箱中吸附2小时，弃去病毒液，PBS缓冲液清洗3次后每孔加入1mL含5％-FBS-DMEM培养液后继续培养，分别于第4、8、12、24、48h收样，用于后续指标测定。

5.根据权利要求4所述的体外感染猪圆环病毒2型建立猪肺泡巨噬细胞炎症模型的方法，其特征在于：所述PCV2病毒感染组分为4个不同浓度，分别是10⁰、10^-1、10^-2、10^-3PCV2。

6.根据权利要求4所述的体外感染猪圆环病毒2型建立猪肺泡巨噬细胞炎症模型的方法，其特征在于：所述指标包括细胞NO分泌水平、ROS水平、GSH、含量、XOD、MPO、iNOS活性及IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10、IFN-γ、IL-8、MCP-1、COX-1、COX-2炎性因子水平。