[发明专利]一种降低烟叶特有亚硝胺的复合酶制剂及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种降低烟叶特有亚硝胺的复合酶制剂及其制备方法和应用，该复合酶制剂由中性蛋白酶、果胶酶、木聚糖酶、糖化酶、β‑葡聚糖酶、α‑淀粉酶、中温淀粉酶、纤维素酶、中性脂肪酶和烟草复合酶中的5种或5种以上，以及无菌蒸馏水组成。经过本发明的复合酶制剂的处理，晒黄烟调制烟叶中TSNAs含量降低了26.40%‑36.81%。本发明成本低，操作方便，易于大规模推广应用，提升烟叶的质量安全，在烟叶原料降害方面具有很大的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种复合酶制剂，尤其是一种降低烟叶特有亚硝胺的复合酶制剂，还涉及其制备方法和应用，属于烟叶加工领域。

背景技术

利用现代生物技术降解烟叶有害成分及其前体物质是卷烟减害的重要途径。近年来，随着人们对吸烟与健康关系的日益重视，烟草中的烟草特有亚硝胺（Tobacco-specificnitrosamines，简称TSNAs）因其潜在的致癌能力而备受关注，成为烟草公司降低烟草危害性的重要研究内容之一。TSNAs主要包括4种有害物质：N-亚硝基去甲基烟碱（简称NNN）、4-(N-甲基-亚硝基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮（简称NNK）、N-亚硝基假木贼碱（简称NAB）和N-亚硝基新烟草碱（简称NAT），大量研究证明TSNAs形成的主要前体物质有烟叶中的氮氧化物、硝酸盐和亚硝酸盐等。新鲜烟叶中几乎不含TSNAs，烟叶TSNAs是在烟叶采收后的调制和贮藏等过程中形成的，因此调制期是控制TSNAs形成的关键环节之一。

目前，国内外降低TSNAs含量的技术覆盖了品种选育、烟株田间管理、调制、醇化和储藏等从种子到烟叶加工的各个环节。在调制和醇化过程中，微生物菌剂是主要的控制烟叶TSNAs含量的生物技术。例如：祝明亮等将分离自白肋烟的6株反硝化细菌处理白肋烟烟叶，调制后烟叶TSNA量降低了27.56%-99.88%（微生物学报, 2004, 44(4):422-426）；汪安云等将分离自白肋烟烟叶的根瘤土壤杆菌喷施于白肋烟烟叶经晾制后可显著降低烟叶TSNAs的含量，比同一时期对照烟叶中TSNA含量降低了81.3%（环境科学学报, 2006, 26(11): 1914-1920）；专利03810579.9采用分离自白莱烟烟叶的可降解TSNAs的少动鞘氨醇单胞菌和/或荧光假单胞菌处理白莱烟烟叶从而降低烟叶TSNAs量；专利03135607.9将分离自烟草的内生细菌铜绿假单胞菌KenLXP30处理白肋烟烟叶显著降低烟叶TSNAs量；专利03135608.7将放射根瘤菌KenLXR34处理白肋烟烟叶显著降低烟叶TSNAs量；专利201110090798.X采用分离自烤烟烟叶的恶臭假单胞菌T2-2菌悬液处理烤烟烟叶，烟叶TSNAs中的NNN和NNK分别降低了28.33%和57.83%。然而，微生物菌剂在烟叶TSNAs含量控制中的应用存在以下几个方面的局限性：（1）微生物菌剂的发酵和制备工艺需要经过大量试验参数的反复优化，此外发酵和制备过程也耗时耗力；（2）微生物菌剂的制备成本较高；（3）微生物在烟叶上的定植能力和生长代谢活性，及环境条件等对其功能发挥影响较大，以上问题在不同程度上限制了微生物菌剂在TSNAs含量控制中的大规模推广应用。

酶具有靶标选择性强、催化效率高、作用条件温和等特点，利用酶处理改善烟叶及烟梗等从而提高其内在品质取得了较多研究成果。与烤烟的烘烤调制方式不同，晒黄烟主要采用在自然环境条件下的晾晒调制方式，调制时的自然环境条件有利于酶作用的发挥。利用酶处理调制期烟叶来降低烟叶调制过程中TSNAs含量的研究鲜见报道。

发明内容

为了克服现有技术问题的不足，本发明提供了一种降低烟叶特有亚硝胺的复合酶制剂，还提供其制备方法及应用，主要是通过喷施酶制剂的方式处理新鲜烟叶后进行烟叶的调制，从而降低调制烟叶中TSNAs的含量，提升烟叶的质量安全，为优质烟叶生产提供技术支持。本发明的技术方案如下：

一种降低烟叶特有亚硝胺的复合酶制剂，由中性蛋白酶、果胶酶、木聚糖酶、糖化酶、β-葡聚糖酶、α-淀粉酶、中温淀粉酶、纤维素酶、中性脂肪酶和烟草复合酶中的5种或5种以上，以及无菌蒸馏水组成，其中，各组分的质量百分比如下：