[发明专利]一种多肽纳米泡及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种多肽纳米泡的制备方法，包括以下步骤：构建重组质粒，所述重组质粒包括Flag标签、脂肪组织靶向性多肽和纳米泡标志性膜蛋白CD63的编码基因；将重组质粒通过脂质体转染到分泌纳米泡的细胞中培养，收集细胞培养液，经超速离心提取多肽纳米泡；本发明还公开了多肽纳米泡及其在制备治疗肥胖药物中的应用。该多肽纳米泡为抗肥胖的药物靶向治疗提供了极大的便利，其具有高载药量的同时，还具有良好的生物兼容性，所载药物经多肽纳米泡的包裹，使得药物具有良好生物相容性的同时，还明显增强了药物在体内的稳定性，延长了药物在体内的循环时间，大大提高了药物的利用率，从而显著增强了药物的靶向抗肥胖活性。

技术领域

本发明涉及纳米泡及其应用，具体涉及一种多肽纳米泡及其制备方法和应用。

背景技术

随着人们生活水平的提高，肥胖人群逐年增加。世界卫生组织报道，作为一种慢性代谢性疾病，肥胖已成为全世界引起死亡的五大风险之一，其原因是由于肥胖可引发多种代谢性疾病，如：2型糖尿病、心脑血管疾病及肿瘤等。因此，针对肥胖的干预治疗是预防和治疗肥胖相关疾病的重要措施。

至今，对于肥胖的治疗主要有饮食行为疗法、外科手术和药物治疗。对于饮食行为疗法来讲，当停止减肥后，体重会严重反弹，甚至超过了减肥前的体重。而外科手术(如：缩胃术、胃旁路手术、胃束带手术)的风险又太大。所以许多肥胖患者把药物治疗作为首选。目前，美国FDA批准的两种减肥药，分别为西布曲明(Sibutramine)和奥利司他(Orlistat)。但长期使用后存在较大副作用，比如前者可引发高血压、失眠等，后者会造成腹泻、排泄失禁等。因此，在参与代谢综合征相关的器官中，如何使得药物能够仅仅作用于脂肪组织，却对其他脏器和组织不造成影响，从而达到不改变人体免疫系统的基础上能更高效治疗代谢综合征的目的，成为现在肥胖治疗面临的重要问题和研究重点。

2004年，发表在“Nature Medcine”上的一篇报道发现一种多肽能特异性的与白色脂肪组织血管的内皮细胞受体结合，其氨基酸序列为CKGGRAKDC。中国专利2010101599163公开了一种棕色脂肪组织靶向性多肽及其应用，公开了经修饰的多肽可以与具有生物药理活性的物质相连接，能够靶向运送药物到达棕色脂肪组织，发挥药理学效应，从而达到靶向治疗疾病的目的，侧重于报道一种棕色脂肪组织靶向性治疗的多肽载体，但该靶向性多肽载体的载药量及所载药物的种类及治疗肥胖的疗效还有待进一步讨论。

为开发具有靶向性治疗代谢疾病(比如恶性肿瘤)的纳米泡药物，有研究者采用人工合成的外源性多肽修饰细胞微泡，但该方法获得的外源性多肽修饰的微泡，其生物兼容性问题有待解决。

发明内容

发明目的：为了解决现有的治疗肥胖的药物靶向性不强且稳定性、生物兼容性差的问题，本发明第一方面提供了一种多肽纳米泡的制备方法，本发明第二方面提供了所述制备方法制备得到的多肽纳米泡，本发明第三方面提供了多肽纳米泡的应用，通过包裹药物(如：核酸类、蛋白类、脂类、糖类、酮类等药物)和不同给药方式(如：静脉注射、皮下或腹腔注射等)靶向治疗肥胖。

技术方案：本发明第一方面提供一种多肽纳米泡的制备方法，包括以下步骤：

(1)构建重组质粒，所述重组质粒包括Flag标签、脂肪组织靶向性多肽和微泡标志性膜蛋白CD63的编码基因，Flag标签和脂肪组织靶向性多肽的编码基因按顺序依次连接在微泡标志性膜蛋白CD63编码基因的起始密码子后；其中所述脂肪组织靶向性多肽的氨基酸序列为CKGGRAKDC；

(2)将步骤(1)得到的重组质粒通过脂质体转染到分泌纳米泡的细胞中培养收集细胞培养液，经超速离心提取多肽纳米泡。