[发明专利]EpDT3适配体修饰的前列腺癌靶向给药载体、递送系统及其制备与应用

说明书

本发明涉及一种EpDT3适配体修饰的前列腺癌靶向给药载体、递送系统及其制备与应用。本发明以聚酰胺‑胺纳米粒为药物载体，质粒pCDNA‑MEG3为模型药物，EpDT3适体为靶向头基，EpCAM为作用靶点，以双功能聚乙二醇NHS‑PEG‑MAL为桥接，构建纳米主动靶向给药系统[EpDT3‑PEG‑PAMAM/pCDNA‑MEG3]。本发明具有很好的靶向性以及抗肿瘤活性，安全性高，稳定性强，易于合成，经济成本低，不仅为前列腺癌特别是激素非依赖性以及转移性前列腺癌的治疗开辟一条新途径，同时也为其他上皮细胞肿瘤的靶向基因治疗提供了新的研究方法和思路。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，是一种EpDT3适配体修饰的前列腺癌靶向给药载体、递送系统及其制备与应用。

背景技术

前列腺癌(Prostatic carcinoma,Prostatic cancer，PCa)是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤，其发病率随年龄的增长而提高，已成为严重威胁人类健康的恶性疾病。目前临床上治疗中晚期PCa主要采用放疗、化疗(包括内分泌治疗)等手段，这些治疗方法存在用药顺应性差、组织选择性差、毒性反应大及耐药性等问题。基因治疗相对于上述方法来说具有许多无可比拟的优点，如靶向性好、毒副作用小及可特异性地杀伤肿瘤细胞等，近年已报道了一系列涉及前列腺癌基因治疗的临床试验，但是外源基因自己不能主动进入细胞，因此基因治疗应用于临床还需要一种安全、高效的传递载体进行递送。

非编码RNA(noncoding RNA，ncRNA)是所有不能编码翻译蛋白质的功能性RNA的统称，包括短链非编码RNA(如siRNA、miRNA等)和长链非编码RNA(Long noncoding RNA，LncRNA)。近年研究发现LncRNA与肿瘤的发生、发展亦有着密切关系，使其成为肿瘤基因治疗的新研究热点。如Zhang等于2003年发现LncRNA MEG3在大部分正常组织中均有表达，但在人类肿瘤细胞(如前列腺癌细胞株DU145、乳腺癌细胞株MCF-7等)中几乎检测不到，推测MEG3可能通过异位表达起到肿瘤抑制作用。后对MEG3进一步研究证明其通过刺激p53介导的转录过程抑制了DNA在脑膜瘤细胞里的合成，从而抑制肿瘤细胞增殖。研究亦证实LncRNAMEG3可抑制非小细胞肺癌细胞(NSCLC)增殖，并可通过影响p53表达诱导NSCLC细胞凋亡。因此，LncRNA MEG3是一种很有临床应用前景的抑癌基因，在体内如何通过靶向纳米给药系统将其转导入前列腺癌等肿瘤细胞就成为转化医学研究关键。

聚酰胺胺(PAMAM)是一种性能卓越的基因药物载体，具有高度分枝，呈单分散性，其末端氨基丰富，正电性强，并易于经过适当的修饰连接抗体、适配体等生物活性物质以增加载体高分子的靶向性。与目前常用的病毒载体、脂质体等药物载体相比，PAMAM具有稳定、对生物活性物质的转运效率高等优点，因此被认为是较好的基因载体。

上皮细胞黏附分子(Epithelial cellular adhesion molecule，EpCAM，又称CD326)是一种高表达于大多数恶性上皮肿瘤细胞表面的糖蛋白，具有加快细胞周期、促进细胞增殖、分化、迁移以及免疫逃逸等多种生物学功能，是目前表达最强的肿瘤表面抗原之一。EpCAM在激素非依赖性前列腺癌细胞株(如PC3、DU145等)、激素依赖性前列腺癌细胞株(如LNCaP、DuCaP)、淋巴结转移前列腺癌细胞中均高表达，转移性前列腺癌病人的血循环前列腺癌细胞80％以上高表达EpCAM，因此EpCAM非常适合作为前列腺癌治疗的靶点，无论是原位前列腺癌细胞，还是血液、淋巴、微环境中转移性前列腺癌细胞，都可通过系统给予抗EpCAM治疗以阻止前列腺癌转移，进一步研究发现EpCAM通过活化PI3/Akt/mTOR信号通路与前列腺癌的转移、放/化疗抗性等相关。

适配体是一种能与多种靶分子特异高效结合的单链或双链寡核苷酸，其制备方便、稳定性好、适用范围广，具有很多蛋白质抗体所不具备的优点。适配体作为肿瘤靶向纳米给药系统的靶头具有非常好的开发前景。