[发明专利]利用超高压协同酶解制备蛋清ACE抑制肽的方法

说明书

本发明公开了利用超高压协同酶解制备蛋清ACE抑制肽的方法。本发明为节约生产成本，提高酶解效率，通过利用超高压预处理方式降低加酶量并达到预期水解效果。本发明以蛋清粉为原料，经超高压预处理，探究100～500Mpa不同压力作用下，在30℃～45℃不同温度条件下处理5～20min后协同酶解法制备蛋清ACE抑制肽，再利用膜过滤技术将蛋清ACE抑制肽分成分子量不同的各个组分，经旋转蒸发及冷冻干燥成粉，通过液相色谱法进行活性测定，得到抑制活性较高的蛋清ACE抑制肽。同时本发明也为超高压预处理技术对鱼、虾等富含蛋白的动物资源的协同酶解制备活性肽提供参考。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种超高压协同酶解制备蛋清ACE抑制肽的方法。

背景技术

随着人们生活方式和饮食结构的变化，高血压病发率逐年升高。据世界卫生组织统计，高血压已经成为人类第三大杀手，因此，高血压治疗迫在眉睫。血管紧张素转化酶(Angiotensin Converting Enzyme，ACE)对生物体内血压的调节起着重要作用，不仅可以催化不具有活性的血管紧张素I转化为具有强烈收缩血管作用的血管紧张素II，还能降解具有舒张血管作用的舒缓激肽并导致其失活。因此，抑制血管紧张素转化酶活性可有助于高血压的治疗。目前临床应用的ACE抑制药存在副作用，人们将目光转向了源于食品的ACE抑制肽研究。

蛋清中含有丰富的蛋白质资源，且蛋白模式与人体的蛋白模式相似，可以被人体全面吸收。蛋清氨基酸组成比较丰富，且疏水性氨基酸、脯氨酸和精氨酸等含量较高，这些氨基酸有利于得到含量较高的降血压物质。蛋清源ACE抑制肽具有抑制血管紧张素转化酶活性的作用，蛋清Alcalase酶酶解液经纯化能够获得具有较高ACE抑制活性的活性肽。

为节约生产成本，提高酶解效率，考虑通过预处理方式降低加酶量并达到预期水解效果。目前对于蛋白预处理的方法主要有酸处理、碱处理、热处理、超声处理等，而超高压处理作为一种新型的加工技术，暂未被应用于食品蛋白质精深加工。超高压技术是食品加工近年来备受关注的高新技术之一。在美国及欧洲，许多国家先后对超高压食品的原理、方法、技术细节以及应用前景等方面进行了广泛的研究。超高压处理是将食品密封于弹性容器或无菌压力系统中，以水或其它流体介质为传压介质，采用100MPa以上(100～1000MPa)压力，在常温或较低温度下处理食品，使食品中酶、蛋白质、核酸和淀粉等生物大分子活性改变、变性或者糊化。超高压处理具有优良的特点：首先，它能在常温或较低温度下达到其作用，从而减少了热处理引起食品的营养成分及色、香、味的损失；其次，它传压速度快、均匀，不存在压力梯度；因此，超高压处理食品效率比较高；另外，超高压技术相对耗能较少。目前，超高压技术被认为是近年来在食品加工和保存技术中最有发展潜力的。

本发明主要利用超高压处理对蛋清蛋白结构的影响。超高压处理主要是破坏蛋白质的三级、四级结构的非共价键，而对共价键作用较小。不同超高压力处理对蛋白质结构的影响不同。一般在100～200MPa下，蛋白质变化是可逆的；但当压力超过300MPa时，蛋白质会发生氢键断裂，产生不可逆变性而改变蛋白质的三级结构。适度的超高压作用可使蛋白质的三级和四级结构破坏，并破坏其疏水键以及离子键等非共价键，使蛋白质肽链伸展，立体结构松散。从而增大肽链与酶的接触面积，使酶解更充分，提高酶解效率。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服在传统常压下蛋白质酶解达不到预期效果且生产成本较高的缺陷，采用超高压技术预处理，改善蛋清蛋白水解进程从而减少加酶量降低生产成本，并获得较高活性ACE抑制肽，本发明以蛋清粉为原料，经超高压预处理，探究100～500Mpa不同压力作用下，在30℃～45℃不同温度条件下处理5～20min后协同酶解法制备蛋清ACE抑制肽，再利用膜过滤技术将蛋清ACE抑制肽分成分子量不同的各个组分，经旋转蒸发及冷冻干燥成粉，通过液相色谱法进行活性测定，得到抑制活性较高的蛋清ACE抑制肽。为实现本发明的目的，采用以下技术方案：