[发明专利]一种应用于肝癌免疫治疗的DC靶向性纳米疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及一种应用于肝癌免疫治疗的DC靶向性纳米疫苗及其制备方法，其是以甘露糖修饰乙二醇壳聚糖为载体材料，以肝癌特异性多肽抗原磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3_144‑152肽（GPC‑3_144‑152，FVGEFFTDV）为免疫抗原，通过静电相互作用制备的纳米疫苗及其制备方法。此种纳米疫苗能够增加树突状细胞（dendritic cell，DC）对抗原的胞吞量，保护抗原不被快速降解和清除、延长抗原的作用时间，利于激发机体产生有效的免疫应答。本发明制备的纳米疫苗原料廉价易得、制备方法简单易重复、易于大规模加工生产，能够增强肝癌的免疫治疗效果，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药领域，尤其是涉及一种应用于肝癌免疫治疗的纳米疫苗及其制备方法。

背景技术

以树突状细胞（dendritic cell，DC）为肿瘤疫苗核心的特异性肿瘤免疫治疗受到越来越多的关注，DC是体内已知功能最强的专职抗原提呈细胞，是启动、调控和维持免疫应答的中心环节。

抗原以游离状态进入机体，会被体液稀释、酶降解，使得DC对抗原的摄取量极低，难以诱导机体产生有效的免疫应答。纳米疫苗可以保护抗原不被快速降解和清除，通过对纳米粒子结构进行设计还可以实现对抗原的靶向输送和控制释放，进而提高DC对抗原的摄取量、延长抗原的作用时间，利于激发机体产生有效的免疫应答。

为了进一步提高纳米疫苗的靶向效果，选择DC表面受体的配体分子修饰到纳米疫苗表面，可制备具有主动靶向性纳米疫苗。甘露糖受体属于C型凝集素超家族，可快速循环于DC细胞膜和早期内涵体间，在较短的时间内即可内化大量抗原，诱导免疫应答。

目前，在肝癌的免疫治疗中以DC疫苗为主的应用较少，主要原因之一是缺乏有效的肝肿瘤抗原。磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（Glypican-3，GPC-3）是一种肝癌胚胎蛋白，通过免疫组化检测发现在蛋白水平，GPC-3在大多数原发性肝癌细胞中过表达，但在正常肝脏和良性肝脏病变检测不到。GPC-3在肝癌与良性肝病的表达差异明显，为拓展肝癌治疗手段提供了新的思路，可以作为肿瘤抗原或治疗靶点。GPC-3_144-152多肽同样能够诱导产生细胞毒T细胞（CTL）反应，不产生自身免疫反应，可作为肝癌特异性抗原。且多肽的纯度更高，更易产业化，与蛋白相比，价格也更低廉。

天然多糖具有良好的生物相容性和生物可降解性，对人体无毒无刺激，廉价易得。壳聚糖是自然界中大量存在的唯一一种碱性多糖，具有优良的生物相容性，生物可降解性，已在食品、医疗、生物技术和药学等领域得到了广泛的应用。但壳聚糖在水中溶解性差，而乙二醇壳聚糖在保持壳聚糖特性的同时，增加了在水中的溶解性，更易于实验操作。

发明内容

为了进一步提高纳米疫苗的靶向效果，增加DC对抗原的胞吞量，同时能够保护抗原不被过早降解及被体液稀释，增加免疫治疗效果，本发明设计了一种应用于肝癌免疫治疗的DC靶向性纳米疫苗及其制备方法。

一种应用于肝癌免疫治疗的DC靶向性纳米疫苗，其特征在于：以甘露糖修饰乙二醇壳聚糖为载体材料，以肝癌特异性多肽抗原磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3_144-152肽（GPC-3_144-152，FVGEFFTDV）为免疫抗原，通过静电相互作用制备的纳米疫苗；其中，所述的甘露糖的取代度为3%～20％；按照质量分数计，所述的GPC-3_144-152的包载量为3%～10％。

进一步，所述的应用于肝癌免疫治疗的DC靶向性纳米疫苗粒径为100nm～1000nm。

一种应用于肝癌免疫治疗的DC靶向性纳米疫苗的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

步骤一、甘露糖修饰乙二醇壳聚糖的制备：