[发明专利]一种HPLC法分析及制备双乙酰科立内酯对映异构体的方法

说明书

本发明公开了一种HPLC法分析及制备双乙酰科立内酯对映异构体的方法，以多糖衍生物涂覆型手性色谱柱为固定相，以正己烷‑异丙醇混合溶剂或正己烷‑乙醇混合溶剂为流动相，采用正相色谱法分析分离。该方法能够简单、准确、高效的分析及制备单一旋光性的双乙酰科立内酯对映异构体，进而实现对其质量控制。

技术领域

本发明涉及一种色谱分析分离方法，尤其是一种分析及制备双乙酰科立内酯对映异构体的高效液相色谱法，属于化学原料制备的技术领域。

背景技术

前列腺素是一类重要的内源性生理活性物质，在激素浓度水平上调节人体多种生理作用，对血压、平滑肌收缩、胃液分泌及血小板凝聚有调节作用。前列腺素是广泛存在于人和动物各组织中的微量成分，含量极低，临床上前列腺素类药物主要由全合成制得。

双乙酰科立内酯是合成前列腺素类药物的一种重要中间体，化学名称为：6-乙酰氧基甲基-7-乙酰氧基-顺式-2-氧杂双环[3,3,0]辛-3-酮，其结构如式(1)所示：

该分子有4个手性中心，根据立体结构及反应机理推断，存在2个对映异构体，分别为(-)-双乙酰科立内酯(化学名为：6β-乙酰氧基甲基-7α-乙酰氧基-顺式-2-氧杂双环[3,3,0]辛-3-酮)和(+)-双乙酰科立内酯(化学名为：6α-乙酰氧基甲基-7β-乙酰氧基-顺式-2-氧杂双环[3,3,0]辛-3-酮)，其中1个作为对映异构体杂质在后续步骤中参与反应，进而形成多种对应杂质，严重影响前列腺素类药物的质量，这也是该类药物临床上引起不良反应的重要因素之一。因此，如何分析及制备该对对映异构体，进而控制前列腺素类药物质量，是目前需要解决的技术问题。

近年来，随着手性色谱填料多样化，手性色谱柱液相色谱法应用日益广泛，但是，使用手性色谱柱高效液相方法分析及制备双乙酰科立内酯对映异构体却少有报道。

因此，如何建立一种能够简单、快速、高效的分析及制备双乙酰科立内酯两种对映异构体的方法，进而实现对其质量的控制，是目前需要解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供了一种应用手性固定相的液相色谱方法对双乙酰科立内酯两种对映异构体进行分析及制备，进而实现对其进行质量控制及单一对映体的制备。

本发明提供了一种HPLC法分析及制备双乙酰科立内酯对映异构体的方法，其特征在于，采用手性色谱填料为固定相并使用弱极性流动相为移动相的正相色谱法进行分析及制备；所述的手性色谱填料为多糖衍生物涂覆型填料，具体为硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)、直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]、纤维素-三(3,5-二甲基苯基甲酸酯)、直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)或纤维素-三(3氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)中的一种；所述的流动相为正己烷-异丙醇混合溶剂或正己烷-乙醇混合溶剂；

所述的分析方法包括以下步骤：

(1).(+)-双乙酰科立内酯和(-)-双乙酰科立内酯对照品分别用乙醇溶解，配置成浓度为0.1mg/mL的对照品溶液；

(2).(±)-双乙酰科立内酯供试品用乙醇溶解，配制成浓度为0.1～1mg/mL的供试品溶液，进样量为5～10μL；

(3).设置正己烷-异丙醇混合溶剂或正己烷-乙醇混合溶剂的比例为95：5～30：70；设置流速为0.5～1.0mL/min；设置液相色谱柱温箱温度为20～40℃；检测波长为205nm；

(4).精密吸取(+)-双乙酰科立内酯和(-)-双乙酰科立内酯对照品及(±)-双乙酰科立内酯供试品溶液分别注入液相色谱柱，参照(+)-双乙酰科立内酯和(-)-双乙酰科立内酯对照品保留时间，完成对双乙酰科立内酯对映异构体的分析；

所述的制备方法包括以下步骤：