[发明专利]一种动物细胞低温冷藏保存和运输的方法

权利要求书

1.一种可用于动物细胞的低温冷藏保存和运输方法，其特征在于：包括(1)细胞培养容器中加入处理好的多孔微载体和含血清培养基，将细胞悬液按所需接种密度接种到容器中培养；(2)细胞生长达到对数生长期后，用细胞活性保存液将培养基置换出来；(3)将附着在多孔微载体的细胞悬浮在细胞活性保存液中，转移到保存容器中，装液量要达到80-90％左右；(4)放入4-8℃冷藏保存或运输；通过定期更换保存液，可以在半个月内冷藏保存保存细胞而活性不损失。

2.根据权利要求1所述的一种可用于动物细胞的低温冷藏保存和运输方法，其特征在于：所述的细胞是指动物细胞，包括原代细胞和细胞株，尤其是指新鲜获取的原代细胞或者复苏后处于培养状态的细胞株。

3.根据权利要求1所述的一种可用于动物细胞的低温冷藏保存和运输方法，其特征在于：所述培养方法是利用多孔微载体培养贴壁细胞并悬浮在培养基中进行正常培养；其特征在于，培养体系由多孔微载体和细胞培养液组成。

4.根据权利要求3所述的细胞培养液，其特征在于：所述细胞培养液是指与所培养的细胞相适应的培养基，包括但不限于MEM、DMEM、IMDM、HAM F12、PRMI1640，以及添加了血清、水解肽、氨基酸，胰岛素、转铁蛋白、硒和乙醇胺(简称ITES)，酵母提取物，植物提取物，动物蛋白等成分形成的个性化培养基。

5.根据权利要求3所述的多孔微载体，其特征在于：所述多孔微载体是指由无机材料和有机材料均制备的多孔载体,包括但不限于天然高分子物质如明胶、胶原、海藻酸钠、纤维素及其衍生物制备的多孔载体；包括但不限于有机合成高分子如聚苯乙烯、聚乙烯等制备的多孔微载体；无机材料如玻璃、陶瓷等制备的多孔微载体。

6.根据权利要求1所述的一种可用于动物细胞的低温冷藏保存和运输方法，其特征在于：所述培养方法是指利用多孔微载体作为生物支架，为细胞的生长和爬行提供充足的生长空间。特别的，是将接种了细胞的微载体悬浮在培养瓶、培养袋、培养罐等容器中，通过震荡、机械搅拌、通气搅拌等手段维持微载体均匀悬浮于培养体系中。

7.根据权利要求1所述的一种可用于动物细胞的低温冷藏保存和运输方法，其特征在于：所述培养方法是利用多孔微载体培养动物细胞，达到对数生长期或者达到所需要的细胞密度后，用细胞活性保存液将培养基置换出来，使细胞的生长速率和代谢活动降低，放置于4-8°进行储运。

8.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，所述细胞活性保存液包括但不限于商品化的专用保存液，如CellMateTM；也包括在平衡盐溶液基础上添加了多种渗透压稳定剂和多种氧自由基清除剂，添加了细胞维持基本代谢所需的能量底物形成的各种自制保护液。添加的化合物包括但不限于HEPES、海藻糖、蔗糖、甘氨酸、丙氨酸、腺苷、α-生育酚、维生素C、去铁胺、1，6-二磷酸果糖等。

9.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，所述置换方法包括但不限于过滤法、低速离心法、静置多次部分置换法。

10.根据权利要求1所述的一种可用于动物细胞的低温冷藏保存和运输方法，其特征在于：所述保存容器包括但不限于细胞培养瓶，普通三角瓶，培养皿，离心管，试管，冻存管等容器。装液量要达到80-90％，只保留少量的空气，以减少细胞的供氧量，降低新陈代谢，同时减少液体流动引起的剪切力损伤。