[发明专利]一种含脯氨酸的首尾环肽合成方法

说明书

本发明涉及一种包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，其包括以下步骤：1)选择固相合成树脂；2)首先偶联Fmoc‑3‑羧基‑Pro‑OAll，然后按照Fmoc固相合成策略，得到NH‑(3‑羧基‑固相合成树脂)‑Pro‑OAll然后依次偶联肽序中的氨基酸残基Fmoc‑AA‑OH；3)固相脱除保护基All，得到NH₂‑AAn‑(3‑羧基‑固相合成树脂)‑Pro‑OH；4)固相首尾环化：偶联AAn上的氨基与Pro上的羧基；5)裂解固相合成树脂，制备中间体环肽粗肽；6)将中间体环肽粗肽在脱羧剂的作用下脱除末端Pro的3位羧基，制备含脯氨酸的环肽。该方法新颖、合成条件温和、工艺简单且工艺稳定。

技术领域

本发明属于药物合成领域，具体涉及一种含脯氨酸的首尾环肽合成方法。

背景技术

对于首尾酰胺键成环的肽，目前在自然界已经有很多发现。首尾环肽药物的研究也得到了非常快速的发展。随着研究的深入，环肽的合成已经引起了越来越多的关注，并且已经在许多研究中取得了一定的成果。

首尾环肽的化学合成大体可分为液相法与固相法。

液相法为先固相制备全保护肽，然后液相成环，最后再脱除保护基。采用液相方法合成首尾成环的肽，反应需要在高度稀释的溶液中(10^-3～10^-4M)进行，反应比较缓慢，活化的羧基可以避免因为单分子或溶剂诱导效应发生分解反应。但是，它的成功合成需要依赖于正交保护的线性前体，需要很繁杂的步骤，这样无疑影响了肽的产率，同时对偶联试剂的要求也非常高。

固相法为在固相载体上直接成环。对于肽序中含有Asp\Glu或者Asn\Gln残基的肽序，一般采用把Asp\Glu主链采用All保护，侧链羧基连接在固相载体上的方法，偶联完成后脱除All保护基团，在固相上完成酰胺键成环的方法完成粗肽合成。

固相合成要比液相合成简单得多，但目前报道的方法中，只有肽序中含有侧链基团的氨基酸残基，才能用此方法，而如果肽序中没有带侧链的氨基酸残基，很难用固相方法。

发明内容

对于肽序中不含带侧链氨基酸而有Pro的首尾环肽，本发明提供了一种全新的、高效的合成方法：首先在树脂上连接Fmoc-3-羧基-Pro-OAll；然后按肽序偶联其他氨基酸残基；偶联完毕后，固相脱除All，紧接着固相成环；最后环肽粗肽脱羧得到含脯氨酸的首尾环肽。该方法新颖、合成条件温和、工艺简单且工艺稳定。

合成路线如下：

本发明涉及一种包含丙氨酸的首尾环肽合成方法，其包括以下步骤：1)选择固相合成树脂；

2)首先偶联Fmoc-3-羧基-Pro-OAll，然后按照Fmoc固相合成策略，得到NH-(3-羧基-固相合成树脂)-Pro-OAll然后依次偶联肽序中的氨基酸残基Fmoc-AA-OH得到NH₂-AAn-(3-羧基-固相合成树脂)-Pro-OAll；

3)固相脱除保护基All，得到NH₂-AAn-(3-羧基-固相合成树脂)-Pro-OH；

4)固相首尾环化：偶联AAn上的氨基与Pro上的羧基；

5)裂解固相合成树脂，制备中间体环肽粗肽；

6)将中间体环肽粗肽在脱羧剂的作用下脱除末端Pro的3位羧基，制备含脯氨酸的环肽。

步骤1)中所述固相合成树脂为wang树脂或2-氯树脂，树脂替代度为0.1-3.0mmol/g，优选0.5-2.5mmol/g，更优选1.0-1.5mmol/g。

步骤2)对于氨基酸的Fmoc-AA-OH形式没有特别限定，可以依照本领域的常规知识使用或者不使用保护基团，可使用的保护基团例如，Trt、Boc、和tBu等)。