[发明专利]一种含脯氨酸的首尾环肽合成方法

权利要求书

1.一种包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，其包括以下步骤：1)选择固相合成树脂；

2)首先偶联Fmoc-3-羧基-Pro-OAll，然后按照Fmoc固相合成策略，得到NH-(3-羧基-固相合成树脂)-Pro-OAll然后依次偶联肽序中的氨基酸残基Fmoc-AA-OH得到NH₂-AAn-(3-羧基-固相合成树脂)-Pro-OAll；

3)固相脱除保护基All，得到NH₂-AAn-(3-羧基-固相合成树脂)-Pro-OH；

4)固相首尾环化：偶联AAn上的氨基与Pro上的羧基；

5)裂解固相合成树脂，制备中间体环肽粗肽；

6)将中间体环肽粗肽在脱羧剂的作用下脱除末端Pro的3位羧基，制备含脯氨酸的环肽。

2.根据权利要求1所述的包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，步骤6)所述脱羧剂为硝酸银和过硫酸钠的混合物。

3.根据权利要求2所述的包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，步骤6)所用溶剂为乙腈水溶液，反应温度为0-100℃，中间体环肽粗肽与硝酸银、过硫酸钠物质的量比为1：0.02：2。

4.根据权利要求3所述的包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，步骤6)反应温度为30-70℃。

5.根据权利要求1所述的包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，步骤2)中偶联Fmoc-3-羧基-Pro-OAll的方法为以成酯键偶联剂将Fmoc-3-羧基-Pro-OAll的3位羧基与固相合成树脂缩合偶联，其中所述的成酯键偶联剂选自HOBt、DMAP一种或多种的组合物。

6.根据权利要求1所述的包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，步骤2)中Fmoc固相合成策略偶联氨基酸包括以下步骤：

2.1)脱除Fmoc，接着用溶剂洗涤树脂，直至用检测方法检测到完全脱除Fmoc为止；

2.2)将合适量的待偶联Fmoc-AA-OH和成酰胺键偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；

2.3)重复2.1)和2.2)，其中脱除Fmoc的试剂为20％的哌啶/DMF溶液。

7.根据权利要求6所述的包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，所述步骤2)中的成酰胺键偶联剂为DIC和化合物A的组合物或DIA和化合物A和化合物B的组合物，其中化合物A为HOBt或HOAt，化合物B为PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU或TBTU。

8.根据权利要求7所述的包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，成酰胺键偶联剂为DIC和化合物A的组合物。

9.根据权利要求1所述的包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，步骤4)固相首尾环化所用试剂为DIC+A或者DIA+A+B，其中A为HOBt或HOAt，B为PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU、TBTU其中一种或几种的组合。

10.根据权利要求1所述的包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，步骤5)所述裂解所用裂解液为TFA、H₂O、PhOMe、苯甲硫醚的混合物。

11.根据权利要求10所述的包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，步骤5)所述裂解所用裂解液为TFA:H₂O:PhOMe:苯甲硫醚＝90:5:4:1。

12.根据权利要求1所述的包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，还包括可选地步骤7)纯化步骤，所述纯化步骤可采用反相高压液相色谱法。

13.根据权利要求12所述的包含脯氨酸的首尾环肽合成方法，所述反相高压液相色谱法包括：以反相十八烷基硅烷为固定相，以体积比0.1％醋酸水溶液/乙腈为流动相，流动相中体积比0.1％醋酸水溶液和乙腈的比例为98:2至50:50，收集目的峰馏分，浓缩冻干。