[发明专利]一种基于表面增强效应的血液中稀有细胞检测方法

说明书

本发明公开了一种基于表面增强效应的血液中稀有细胞检测方法，特点是：包括在载玻片的表面采用喷涂的方法镀上一层等离子有色金属膜，制备得到金属纳米结构的SERS芯片；将SERS芯片安装至捕获仪的捕获盒内；将经过预处理的血液样本装载于捕获仪中，设置捕获仪的运行参数，利用免疫磁性富集方法对血液样本进行稀有细胞的捕获；将捕获完成的金属纳米结构的SERS芯片从捕获盒中取出，37℃干燥后对SERS芯片进行免疫荧光染色；使用检测系统对染色后的稀有细胞进行扫描检测，优点是：能够明显提高血液中例如CTC细胞等稀有细胞的捕获效率，增强其检测信号。

技术领域

本发明涉及医学诊断领域，尤其涉及一种基于表面增强效应的血液中稀有细胞检测方法。

背景技术

恶性肿瘤严重威胁人类健康，其致死的主要原因是部分肿瘤细胞获得侵袭能力并造成远处转移。肿瘤转移是一个涉及多步骤因素的复杂过程，具有转移潜能的肿瘤细胞脱离原发病灶，以极少的数量转移到血液、骨髓、淋巴结或远处器官中，使用常规的检测手段难以发现，称为肿瘤的微转移。肿瘤细胞的脱落、侵袭并进入血液循环是实现肿瘤转移的最初阶段，并为最终形成肿瘤转移病灶提供了可能，因此，在外周血液中检测循环肿瘤细胞(Circulating tumor cells,CTC)具有重要的临床应用价值。

1869年科学家首次提出CTC的概念，目前肿瘤转移理论认为，肿瘤细胞需要先从原发灶脱离并进入血液或淋巴循环，才能在远处形成转移灶。因此理论上CTC与肿瘤的血行转移有直接关系。CTC的检测有助于早期转移肿瘤患者的诊断、监测术后患者肿瘤的复发与转移、评估抗肿瘤药物的敏感性与患者愈后以及选择个体化的治疗策略。但是，对于CTC的检测和分析并不容易，因为CTC并没有显著的特异性与其他血细胞明确区分，而且CTC在外周血中的数量极少，平均在10⁶-10⁷个白细胞中有1个。

总体来说，CTC的捕获和检测包括CTC细胞富集(一般通过细胞大小、密度差异、免疫磁微粒、微流体等方法)和CTC细胞下游鉴别分析(一般通过特异性蛋白的表达、核酸序列等方法)。目前，应用最多的CTC细胞富集方法是表面靶向蛋白EpCAM(Epithelial celladhesion molecule，上皮细胞粘附分子)和CTC芯片相结合的免疫磁性富集方法。该方法依赖于肿瘤细胞的免疫磁性富集，利用链接于结合EpCAM的抗体的磁流体，该上皮细胞粘附分子在上皮衍生细胞上表达。因此，将该磁流体加入肿瘤患者外周血中，磁流体即与CTC细胞结合，当在外磁场的作用下，结合有CTC细胞的磁流体就会被筛选出来，附着于CTC芯片上，从而完成CTC细胞的富集捕获。

其中，在CTC芯片的选择上，从原来的选自普通载玻片发展到选自醛改性载玻片或环氧树脂包被的载玻片等，但这些CTC芯片都仍存在缺陷，其中最大的缺陷在于：对CTC细胞的捕获效率低，以及由于检测信号不强造成的CTC检测假阴性结果。

发明内容

为了解决上述现有技术中存在的不足，本发明提供一种基于表面增强效应的血液中稀有细胞检测方法，能够明显提高血液中例如CTC细胞等稀有细胞的捕获效率，增强其检测信号。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种基于表面增强效应的血液中稀有细胞检测方法，包括以下步骤：

(1)在载玻片的表面采用喷涂的方法镀上一层等离子有色金属膜，制备得到金属纳米结构的SERS芯片；

(2)将金属纳米结构的SERS芯片安装至捕获仪的捕获盒内，并安装配套使用的捕获耗材包及配套试剂；

(3)将经过预处理的血液样本装载于捕获仪中，设置捕获仪的运行参数，利用免疫磁性富集方法对血液样本进行稀有细胞的捕获；

(4)将捕获完成的金属纳米结构的SERS芯片从捕获盒中取出，37℃干燥，干燥后对金属纳米结构的SERS芯片进行免疫荧光染色；

(5)使用检测系统对染色后的稀有细胞进行扫描检测。