[发明专利]一种花生DNA快速提取的方法

说明书

本发明涉及DNA提取方法技术领域，特别涉及一种花生DNA快速提取的方法。包括如下步骤：(1)花生叶片样品在液氮中研磨成粉末状；(2)向样品管中加入预热的CTAB缓冲液，颠倒混匀后，置于65℃水浴锅中～30min；(3)将样品管取出，加入等体积预冷的酚‑氯仿溶液，上下颠倒10min后离心；(4)取上清液，沿管壁缓慢加入‑20°预冷的异丙醇，接触面出现沉淀层；(5)弃去上清液，吸取沉淀层置于70％乙醇中洗涤，离心；(6)室温干燥DNA沉淀，加入适量TE溶液溶解DNA沉淀。本发明高效的提取花生叶片DNA，能够在短时间内快速提取，操作简单，纯度高，成本低。本发明改变了传统花生叶片DNA提取方式，具有进步性，为后续花生叶片DNA研究奠定了基础。

技术领域

本发明涉及DNA提取方法技术领域，特别涉及一种花生DNA快速提取的方法。

背景技术

花生作为重要的经济作物，在农作物中占有重要的作用。在我国，花生种质基础有限，抗病资源匮乏，花生本身也易遭受危害，导致花生产量和质量均有限制。利用优质遗传基因对花生进行遗传改良，培育优质花生品种，是近些年来基因组研究的重大课题，也是植物分子生物学研究的重点。

基因组DNA提取是植物分子生物学研究花生遗传的技术基础。目前，植物DNA的提取方法主要有CTAB法和SDS法。但是，不同植物由于物种的差异，提取的效果各不相同。花生叶片中含有丰富的次生代谢产物。其中，酚类化合物是花生叶片中种类最多、分布最广的次生代谢产物之一，该类物质在细胞破碎时易与核酸作用形成稳定的不可逆的复合物，严重影响到花生叶片DNA的提取纯度。最终，导致提取的花生DNA浓度和纯度均达不到高通量测序的要求，阻碍了基因组学的进一步研究。

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何克服现有技术的不足，提供一种花生DNA快速提取的方法，实现了提高花生DNA质量且缩短提取时间的目的。

本发明为实现上述目的采用的技术方案是：一种花生DNA快速提取的方法，包括如下步骤：

(1)取花生叶片样品，于液氮环境中研磨，得到叶片粉末；

(2)向叶片粉末的样品管中加入CTAB缓冲液，迅速颠倒混匀后，于65℃水浴锅中保温，保温时间20-40min，其中每间隔15min上下颠倒3-4次，保持混悬状态；

(3)将样品管取出，加入适量4℃预冷的酚-氯仿溶液，上下颠倒震荡5-10min，再离心，得到上清液；

(4)取上清液，沿管壁缓慢加入适量-20℃预冷的异丙醇，接触面逐渐析出沉淀层；

(5)轻轻弃去上清，吸取沉淀层置于直接置于70％的乙醇中洗涤，离心，弃去液体，得到DNA沉淀；

(6)室温下干燥DNA沉淀，加入适量TE溶液溶解沉淀的DNA。

作为优选，所述步骤(1)包括：称取4周左右的花生幼嫩叶片40-50mg，置于研钵中，加入液氮，快速研磨至粉状。

作为优选，所述步骤(2)包括：向叶片粉末的样品管中加入650μL水浴锅中预热的CTAB缓冲液，再加入RNase A酶6.5ul，振荡1-2min，再置入65℃水浴锅中保温20min～40min，保温期间每隔15min上下颠倒样品管3-4次。

作为优选，所述步骤(3)中，4℃预冷的酚-氯仿溶液为650μL，所述离心于12000r/min下离心10min。

作为优选，所述步骤(3)重复一次。

作为优选，所述步骤(4)中，所述-20℃异丙醇用量为600μL。

作为优选，所述步骤(4)中，上清液为500-600μL。

作为优选，所述步骤(5)中，乙醇为600μL 70％的乙醇。