[发明专利]一种花生DNA快速提取的方法在审
| 申请号： | 201810549964.X | 申请日： | 2018-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN108410865A | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 王娟;单世华;李春娟;闫彩霞;赵小波 | 申请（专利权）人： | 山东省花生研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京中北知识产权代理有限公司 11253 | 代理人： | 孙静静 |
| 地址： | 266000 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 花生叶片DNA 快速提取 沉淀层 样品管 预冷 颠倒 花生 花生叶片 氯仿溶液 取上清液 室温干燥 研磨 进步性 上清液 水浴锅 异丙醇 预热的 乙醇 管壁 混匀 液氮 洗涤 溶解 取出 研究 | ||
1.一种花生DNA快速提取的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取花生叶片样品，在液氮中充分研磨，得到叶片粉末；
(2)向叶片粉末的样品管中加入CTAB缓冲液，迅速颠倒混匀后，于65℃水浴锅中保温，保温时间20～40min，其中每间隔15min上下颠倒3～4次；
(3)将样品管取出，加入适量4℃预冷的酚-氯仿溶液，上下颠倒5-10min，再离心，得到上清液；
(4)取上清液，沿管壁缓慢加入适量-20℃预冷的异丙醇，接触面出现沉淀层；
(5)轻轻弃去上清，吸取沉淀层置于直接置于70％的乙醇中洗涤，离心，弃去液体，得到DNA沉淀；
(6)室温下干燥DNA沉淀，加入适量TE溶液溶解沉淀的DNA。
2.根据权利要求1所述的一种花生DNA快速提取的方法，其特征在于：所述步骤(1)包括：称取4周左右的花生幼嫩叶片40-50mg，置于研钵中，加入液氮，快速研磨至粉状。
3.根据权利要求1所述的一种花生DNA快速提取的方法，其特征在于：所述步骤(2)包括：向叶片粉末的样品管中加入650μL预热的CTAB缓冲液，再加入RNase A酶6.5ul，振荡1-2min，放入65℃水浴锅中保温20～40min，保温期间每隔15min上下颠倒样品管3-4次。
4.根据权利要求1所述的一种花生DNA快速提取的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，预冷的酚-氯仿溶液为650μL，所述离心于12000r/min离心10min。
5.根据权利要求1或4所述的一种花生DNA快速提取的方法，其特征在于：所述步骤(3)重复一次。
6.根据权利要求1所述的一种花生DNA快速提取的方法，其特征在于：所述步骤(4)中，所述-20℃异丙醇用量为600μL。
7.根据权利要求1所述的一种花生DNA快速提取的方法，其特征在于：所述步骤(4)中，上清液为500-600μL。
8.根据权利要求1所述的一种花生DNA快速提取的方法，其特征在于：所述步骤(5)中：乙醇为70％的600μL用量。
9.根据权利要求1所述的一种花生DNA快速提取的方法，其特征在于：所述步骤(5)离心于10000r/min件下进行，所述步骤(5)可重复一次。
10.根据权利要求1所述的一种花生DNA快速提取的方法，其特征在于：所述步骤(6)中TE溶液为50～70μL。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东省花生研究所，未经山东省花生研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810549964.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
