[发明专利]一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括：链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的甲状腺素衍生物，生物素标记的甲状腺素抗体，测试稀释液，甲状腺素校准品，甲状腺素质控品。本发明的试剂盒与现有试剂盒相比，制备工艺更简单，成本更低，检测范围宽，稳定性好。

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，涉及检测血清中游离甲状腺素 FT4含量的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。

背景技术

四碘甲腺原氨酸（Tetraiodothyronine，T4）是由甲状腺滤泡上皮细胞合成和分泌的甲状腺激素，分子量为777，半衰期为6-7天，是通过甲状腺球蛋白酪氨酸残基的碘化合成的，通过酶解作用进入血液循，对人体的新陈代谢和生长发育有着重要的作用。

T4的形成和释放受到促甲状腺激素（TSH）的调节。体内大部分的T4（99%以上）是与转运蛋白结合，包括甲状腺结合蛋白（TBG），前白蛋白（TBPA）和白蛋白，只有极少量的T4（约0.04%），才以游离的形式存在于血清中。TBG的浓度改变会使T4的浓度发生变化，但FT4的浓度不会受到影响。结合T4与游离T4之间呈可逆的平衡状态，只有游离T4才能进入靶细胞与受体结合发挥其生理功能。T4在体内影响蛋白质，脂和碳水化合物等物质的代谢，在外周组织，能进一步经5’脱碘作用代谢成更具活性甲状腺激素（T3）。

血清/血浆中FT4浓度与有效的甲状腺素比率（ETR）呈高度的相关。甲状腺功能亢进，医源性或中毒性甲状腺功能亢进FT4会升高，各种原因所致TBG升高，如雌激素，肝炎等，也使T4升高但FT4不升高；各种原因所致的甲低病例中，FT4均显著低于正常范围。一般认为在临床诊断中，FT4测定的优点是不受其结合蛋白质浓度和结合特性变化的影响，最能反映甲状腺功能，与TSH联合检测更能提高诊断正确率。

用于体内游离甲状腺素测定的主要方法有放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、化学发光免疫分析法等。 目前常用的放射免疫分析法（RIA）是用I¹²⁵标记甲状腺素半抗原来实现的，其合成工艺复杂，有效期短，对环境有一定污染，影响检测结果的因素较多。近几年来，化学发光免疫分析技术发展迅速，灵敏度、特异性以及自动化程度均达到或超过了RIA水平，特别是标记物的稳定性和不污染环境是RIA法无法比拟的。

目前各大中型医院均进口了全自动化学发光免疫分析系统，但是仪器和试剂价格昂贵。

目前已有多件磁微粒化学发光方法检测甲状腺素的专利申请，申请号（201510518771）的专利申请使用的是异鲁米诺发光标记物标记甲状腺素抗体，检测灵敏度较低，稳定性较差。

发明内容

本发明要解决的问题是提供游离甲状腺素的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了放射性免疫分析的试剂有效期短、存在放射性污染、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低，稳定性差，成本高的缺陷。本发明公开了一种制备工艺简单、成本低廉、稳定性好的游离甲状腺素的化学发光免疫定量检测试剂盒以及制备方法。

一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的甲状腺素衍生物，生物素标记的甲状腺素抗体，测试稀释液，甲状腺素校准品，甲状腺素质控品。

优选地，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的粒径为1um～1.5um的四氧化三铁悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成的悬浮液，所述磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mM Tris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL，优选的浓度为0.5mg/mL；