[发明专利]一种用于检测狂犬病毒抗体的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于狂犬病毒抗体检测的试剂盒，属于生物诊断技术领域。试剂盒包括偶联狂犬病毒抗原的磁珠、和狂犬病毒抗体结合并带有标记物的二抗、狂犬病毒抗体标准品、狂犬病毒抗体质控品、样本稀释液、洗涤液，狂犬病毒抗原的DNA序列如Seq No.1所示，狂犬病毒抗原的氨基酸序列如Seq No.2所示。本发明试剂盒采用管式磁珠首先把待测物分离出来，再采用化学发光法进行检测，避免了杂质的干扰，降低了假阳性的出现，提高检测灵敏度。

技术领域

本发明属于生物诊断技术领域，尤其涉及一种用于检测狂犬病毒抗体的试剂盒。

背景技术

狂犬病是一种人畜共患病，由被感染动物唾液中发现的一种病毒引起，其是通过咬伤或开放性创伤传染给宠物和人。狂犬病毒(Rabies virus，RV)属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病毒属(Lyssavirus)，外形呈弹状，核衣壳呈螺旋对称，表面具有包膜，内含有单链RNA；狂犬病毒是引起狂犬病的病原体。

狂犬病毒感染中枢神经系统，引起被感染个体脑部病变并最终死亡。从接触病毒到临床症状的出现可能间隔两周乃至数月，在出现明显临床症状的前几天，便可在动物的唾液中检测到狂犬病毒。但是，被感染的动物都会随着病症的发展最终走向死亡；被感染的蝙蝠、浣熊、狐狸、臭鼬、狗和猫会给人类带来极大的危险。全球每年有超过50000人死于狂犬病。作为人畜共患的急性传染病，狂犬病几乎没有有效的治疗手段；一旦发病，致死率接近100％。有必要对犬、猫等宠物进行严加管理，定期进行疫苗注射。若人被狂犬咬伤，应立即清洗伤口，可用20％肥皂水、去垢剂、含胺化合物或清水充分冲洗；冲洗后，尽快注射狂犬病毒免疫血清。

疫苗接种后，动态检测狂犬病毒抗体产生是极为重要的，起到监控狂犬病的作用。市场上现有的检测狂犬病毒抗体的试剂盒有胶体金法和ELISA法，现有的检测试剂盒存在一些不足：1)传统的胶体金法，无法定量，且检测灵敏度低；2)ELISA法可以实现定量检测，但灵敏度仍无法满足疫苗接种后抗体产生的动态检测。

因此，有必要设计出一种试剂盒，该试剂盒能动态检测狂犬病毒抗体。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种用于检测狂犬病毒抗体的试剂盒，该试剂盒能动态检测狂犬病毒抗体。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种狂犬病毒抗原，所述狂犬病毒抗原为融合蛋白，所述狂犬病毒抗原的DNA序列如Seq No.1所示，所述狂犬病毒抗原的氨基酸序列如Seq No.2所示。

另外，本发明还提供所述的狂犬病毒抗原的制备方法，其包括以下步骤：

S21)融合蛋白构建：选取狂犬病毒的糖蛋白膜外区第1位至第440位氨基酸为氮端，狂犬病毒的核蛋白第300位至第450位氨基酸为碳端，两个肽链之间以柔性连接肽GGSGG相连，融合蛋白C末端带有6个His；其中，G表示为甘氨酸，S表示为丝氨酸，His表示为组氨酸；

S22)真核表达载体构建，表达融合蛋白的细胞株构建；

S23)融合蛋白制备与纯化。

另外，本发明还提供一种用于检测狂犬病毒抗体的试剂盒，其包括偶联狂犬病毒抗原的磁珠、和狂犬病毒抗体结合并带有标记物的二抗、狂犬病毒抗体标准品、狂犬病毒抗体质控品、样本稀释液、洗涤液，所述狂犬病毒抗原的DNA序列如Seq No.1所示，所述狂犬病毒抗原的氨基酸序列如Seq No.2所示。

作为上述技术方案的改进，所述偶联狂犬病毒抗原的磁珠是通过以下方法进行制备：

S41)用包被缓冲液清洗羧基磁珠，向清洗后的羧基磁珠中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，置于室温下活化；所述包被缓冲液为0.05mol/l吗啉乙磺酸，包被缓冲液的pH值为6.0；