[发明专利]一种用于检测狂犬病毒抗体的试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测狂犬病毒抗体的试剂盒，其特征在于，包括偶联狂犬病毒抗原的磁珠、和狂犬病毒抗体结合并带有标记物的二抗、狂犬病毒抗体标准品、狂犬病毒抗体质控品、样本稀释液、洗涤液，所述狂犬病毒抗原为融合蛋白，所述狂犬病毒抗原的DNA序列如SeqNo.1所示，所述狂犬病毒抗原的氨基酸序列如Seq No.2所示；

所述的狂犬病毒抗原的制备方法，包括以下步骤：

S21)融合蛋白构建：选取狂犬病毒的糖蛋白膜外区第1位至第440位氨基酸为氮端，狂犬病毒的核蛋白第300位至第450位氨基酸为碳端，两个肽链之间以柔性连接肽GGSGG相连，融合蛋白碳末端带有6个His；其中，G表示为甘氨酸，S表示为丝氨酸，His表示为组氨酸；

S22)真核表达载体构建，表达融合蛋白的细胞株构建；

S23)融合蛋白制备与纯化；

所述偶联狂犬病毒抗原的磁珠是通过以下方法进行制备：

S41)用包被缓冲液清洗羧基磁珠，向清洗后的羧基磁珠中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，置于室温下活化；所述包被缓冲液为0.05mol/l吗啉乙磺酸，包被缓冲液的pH值为6.0；

S42)用包被缓冲液洗去未反应的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，再加入狂犬病毒抗原进行室温反应；

S43)用封闭缓冲液置换反应液，再加入封闭缓冲液对偶联狂犬病毒抗原的磁珠进行浓度调节，置于冰箱保存；所述封闭缓冲液由0.05mol/l Tris、质量体积比为2％牛血清白蛋白、体积比为0.05％Triton X-100和质量体积比为0.09％叠氮化钠组成，且封闭缓冲液的pH值为7.5；

所述二抗与吖啶酯偶联，所述试剂盒还包括底物激发液A和底物激发液B，所述底物激发液A由0.1mol/l浓硝酸、体积比为0.15％过氧化氢和体积比为0.1％TrionX-100组成，所述底物激发液B由0.35mol/l氢氧化钠和体积比为2.5％TrionX-100组成。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于保存偶联吖啶酯的二抗的发光试剂保存液，所述发光试剂保存液由pH值为6.3的PBS缓冲液、质量体积比为1％海藻糖和体积比为0.5％TrionX-100组成。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液由pH值为7.4的PBS缓冲液和体积比为0.05％Proclin300组成。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为体积比为0.05％PBST缓冲液。