[发明专利]一种提高早梨茎尖包埋脱水法超低温保存效果的方法

说明书

提高早梨茎尖包埋脱水法超低温保存效果的方法：用四种含有碳纳米管和石墨烯量子点的培养基依次对早梨茎尖进行处理，可显著提高茎尖的冻后成活率。本发明与现有技术比较，早梨茎尖包埋脱水法超低温保存效果好、成活率高、茎尖易再生。

技术领域：

本发明涉及一种提高植物茎尖包埋脱水法超低温保存效果的方法，确切地说是一种提高早梨茎尖包埋脱水法超低温保存效果的方法。

背景技术：

我国梨树种植历史悠久，且其具有较强的适应环境能力，目前长江南北均有许多适应当地环境的地方特优品种。早熟梨树品种俗称南方早熟梨，其梨果基本是在6月到8月之间成熟，较北方梨的成熟期显著提早，填补了夏天新鲜水果的供给不足，深受广大百姓欢迎和喜爱。江西省上饶县花厅镇和田墩镇气候宜人，雨量充足，具有得天独厚的条件，两个乡镇出产的早熟梨品质优异、口味独特、爽口多汁、营养全面，2012年被国家农业部正式授予“国家农产品地理标志”称号。上饶早梨不仅供作新鲜水果食用，还可在医药上用作退烧剂，具有生津润肺、清热化痰、解热消暑等功效。上饶早梨主要种植地为上饶县花厅镇和田墩镇。经过三百多年的栽培，两个乡镇已经培育出“六月雪”、“黄皮消”两个特优地方品种。这两个上饶早梨特优地方品种目前基本是以农家种存在的，这些农家种与花厅镇和田墩镇的环境和病虫害协同进化过程中，形成了特异且优良的能适应当地环境的性状，且梨果营养保健成分十分丰富，是江西早熟梨难得的天然基因库。超低温保存是目前植物种质资源有效、安全、稳定、经济、长期保存的方法。包埋脱水法是将样品用海藻酸钙包埋和脱水后，投入液氮中保存的方法。该方法容易掌握，可缓和脱水过程，简化脱水程序，减少环境因子的影响，而且一次能处理较多的材料，在植物种质资源的保存上具有较大的发展前景。但包埋脱水法超低温保存也存在成活率低、保存效果不佳等问题。针对这些问题，本发明开发了一种提高早梨茎尖包埋脱水法超低温保存效果的方法，可为上饶早梨种质资源的长期保存提供技术基础。

发明内容：

本发明的目的是提供一种成活率高、茎尖易再生的提高早梨茎尖包埋脱水法超低温保存效果的方法。实现本发明目的的技术方案是，一种提高早梨茎尖包埋脱水法超低温保存效果的方法，其特征在于有以下步骤：(1)在超净工作台内，切取早梨茎尖并将其接种于液体培养基一：MS+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+3％(w/v)海藻酸钠+0.3M蔗糖；(2)吸取茎尖转移到液体培养基二：0.4M蔗糖+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+0.1M CaCl₂，进行常规包埋；(3)将包埋珠转移到液体培养基三：MS+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+0.5M蔗糖，进行常规预培养；(4)经空气或硅胶常规脱水、液氮常规保存和常规化冻后，将包埋珠转移到固体再生培养基四：MS+1-2mg/L噻苯隆+0.1-0.3mg/L NAA+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂，接种后将材料放入培养室进行常规条件培养，可显著提高茎尖的冻后成活率。

具体实施方式：

结合下述实施例对本发明作进一步说明：

(1)第一次处理

在超净工作台内，切取早梨茎尖并将其接种于液体培养基一：MS+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+3％(w/v)海藻酸钠+0.3M蔗糖；

(2)第二次处理

吸取茎尖转移到液体培养基二：0.4M蔗糖+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+0.1M CaCl₂，进行常规包埋；

(3)第三次处理

将包埋珠转移到液体培养基三：MS+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+0.5M蔗糖，进行常规预培养；

(4)第四次处理

经空气或硅胶常规脱水、液氮常规保存和常规化冻后，将包埋珠转移到固体再生培养基四：MS+1-2mg/L噻苯隆+0.1-0.3mg/L NAA+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂，接种后将材料放入培养室进行常规条件培养，可显著提高茎尖的冻后成活率。