[发明专利]检测血液中丙戊酸含量的液相色谱分析方法

权利要求书

1.一种检测血液中丙戊酸含量的液相色谱分析方法，其特征在于：它包括以下步骤：

(一)标准溶液的标定

首先用移液枪将至少三种不同浓度的标准工作液10μL、10μL标准内标液和190μL空白血清分别置于1.5ml离心管中混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为1000-2000rpm下涡旋混匀30s-1min后，加入含有4-6％高氯酸水溶液的沉淀剂200μL，并在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀2-4min后，再以10000-15000rpm的转速下高速离心5-10min，得到上清液，分别取上述上清液200uL，用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对上述上清液进行检测，分别得出上述至少三种标准溶液中的丙戊酸色谱图和正辛酸色谱图，以上述至少三个标准溶液的丙戊酸峰面积与正辛酸峰面积之比作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有丙戊酸的浓度与标准内标液中含有正辛酸浓度之比作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b，标准工作液是含有丙戊酸的溶液，标准内标液是含有正辛酸的溶液；

(a)标准工作液的配制：

精确称取丙戊酸标准品45mg置于1ml容量瓶，用甲醇进行溶解，并定容于1ml，得到标准储备液A，其丙戊酸的浓度为45000mg/L，将标准储备液A用含水量为10％-40％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有400-4000μg/mL丙戊酸的范围内配置出各浓度的标准工作液，并在-80℃条件下保存；

(b)标准内标液的配制

精确称取正辛酸标准品210.79mg于2mL试管中，用2mL甲醇溶解，得到内标储备液B，其正辛酸浓度为105395mg/L，将内标储备液B用含水量为10％-40％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，得到含有正辛酸浓度为10500mg/L的标准内标液，并在-80℃条件下保存，

(二)检测血液的离心

取待检测血液至少5ml，在离心速度为3500rpm下离心10min，得到上清液即血清，将上述血清置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；

(三)待测样品处理

(c)用移液枪移取步骤(b)的标准内标液10uL于1.5ml的离心管中，然后加入步骤(二)的200uL的血清于上述离心管中，在离心速度为1500-2500rpm下离心30s-1min；然后用移液枪移取含有4-6％高氯酸水溶液的沉淀剂200μL加入上述离心管中，再以1200-2000rpm的转速下涡旋混合2-4min后，在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min，得到上清液即为待测样品；

(四)待测样品的检测

移取步骤(c)待测样品200uL，使用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对上述待测样品进行检测，得出上述待测样品的丙戊酸色谱图和正辛酸色谱图，将上述色谱图中的丙戊酸峰面积和正辛酸峰面积之比y代入上述步骤(一)的标准曲线方程y＝a*x+b中，通过计算得到待检测样品中丙戊酸浓度与标准内标液中正辛酸浓度之比x，标准内标液中正辛酸浓度是已知的，通过计算得到待检测血液中的丙戊酸药物浓度。

2.如权利要求1所述的检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：在步骤(一)中使用七种不同浓度的标准工作液，七种不同浓度的标准工作液分别为含有400、800、1200、1600、2000、3000和4000μg/mL浓度的丙戊酸溶液。

3.如权利要求2所述的检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述沉淀剂是含有5％高氯酸水溶液。

4.如权利要求3所述的检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：在步骤(a)和(b)中的稀释液是由3∶7的水和甲醇组成的稀释液。

5.如权利要求4所述的检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪所使用的在线过滤器为SSI COL PRE-FILTER WATER 1/160.5M。