[发明专利]一种杂交鹅掌楸亲缘关系的鉴定方法

说明书

本发明公开了一种杂交鹅掌楸亲缘关系的鉴定方法及其专用试剂盒，该方法包括：1)提取杂交鹅掌楸叶片DNA；2)进行PCR检测；3)用引物18.2能特异性扩增出400bp的产物的母本为中国鹅掌楸，能特异性扩增出382bp的产物母本为北美鹅掌楸，再用引物700对中国鹅掌楸的进行PCR扩增，能特异性扩增出700bp产物的母本为中国鹅掌楸西部种源，能特异扩增出242bp产物的母本则为中国鹅掌楸东部种源；对北美鹅掌楸的用引物700进行PCR扩增，均特异获得700bp的产物。本发明可对幼苗阶段的杂交鹅掌楸天然林进行有效鉴定，具有速度快，效率高，结果准确，重复性与稳定性好等优点。

技术领域

本发明属于树种鉴定技术领域，具体涉及一种杂交鹅掌楸亲缘关系的鉴定方法。

背景技术

鹅掌楸属(Liriodendron L.)是木兰科(Magnoliaceae)植物，属古老属种之一。现包括三个种：中国鹅掌楸(Liriodendron chinense(Hemsl.)Sarg.)，北美鹅掌楸(Liriodendron tulipifera Linn.)以及两者杂交种杂交鹅掌楸Liriodendron chinense×tulipifera。鹅掌楸属植物是研究植物进化历史进程的理想材料，具有重要的研究意义。

中国鹅掌楸树干通直，可用作木材，马褂形三裂叶片，具有较高的观赏价值属于国家二级珍稀濒危保护植物。北美鹅掌楸材质优良，淡黄褐色，纹理密致美观，切削性光滑，易施工，为船舱，火车内部装修及室内高级家具用材，为美国重要用材树种之一。杂交鹅掌楸具杂交优势，抗逆性与生长特性均明显优于中国种和美国种。但由于鹅掌楸属植物自然授粉不良，发芽率低，现在得到杂交种的方式主要为人工授粉或嫁接繁殖。现有的方法都相对来说比较繁杂，人们一直在寻找更加方便有效的方法。

传统的杂交鹅掌楸亲缘关系鉴定主要是利用形状表现上的差异进行识别和区分，例如形态学、解剖学和同工酶酶谱等方法，但是形态标记受环境影响较大，同工酶标记也受基因表达的影响而限制其使用。SSR分子标记的出现一定程度上解决了部分亲缘关系鉴定的困难，但是仍存在亲缘关系鉴定精度不高等不足，仍不能满足需要。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种杂交鹅掌楸亲缘关系鉴定方法，可对幼苗阶段的杂交鹅掌楸天然林进行有效鉴定，速度快，效率高，结果准确。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种杂交鹅掌楸亲缘关系鉴定方法，包括以下步骤：

1)提取后代树种的叶片DNA；

2)进行PCR检测；

3)用引物18.2能特异性扩增出400bp的产物的母本为中国鹅掌楸，能特异性扩增出382bp的产物母本为北美鹅掌楸；

4)再用引物700对已鉴别为母本为中国鹅掌楸的进行PCR扩增，能特异性扩增出700bp产物的母本为中国鹅掌楸西部种源，能特异扩增出242bp产物的母本则为中国鹅掌楸东部种源；对已鉴别为母本为北美鹅掌楸的用引物700进行PCR扩增，均特异获得700bp的产物。

步骤1)中，叶片为刚展开的嫩叶，液氮处理后放置-80℃备用。

步骤2)中，DNA提取采用CTAB法进行。