[发明专利]促根抗盐的碳氮磷协同菌群的筛选及协同菌剂的制备与应用有效
申请号: | 201810541787.0 | 申请日: | 2018-05-30 |
公开(公告)号: | CN108676751B | 公开(公告)日: | 2021-12-17 |
发明(设计)人: | 田永强;曹云娥;张雪艳;李建设;高艳明 | 申请(专利权)人: | 宁夏大学 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;A01N63/27;A01N63/20;A01P21/00;A01G22/05;A01G7/06;C12R1/41;C12R1/38;C12R1/01 |
代理公司: | 北京化育知识产权代理有限公司 11833 | 代理人: | 尹均利 |
地址: | 750021 宁夏回族*** | 国省代码: | 宁夏;64 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 促根抗盐 碳氮磷 协同 筛选 制备 应用 | ||
1.一种促根抗盐的碳氮磷协同菌群的筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:
采集样品:采集盐碱地野生植物的根系样品;
制备固态微生物接种原料:将采集到的盐碱地野生植物的根系样品利用微生物活性保持型缓冲液进行冲洗,并将冲洗得到的根系样品悬浮液进行离心过滤,得到离心沉淀和上清液,将得到的上清液放置于无菌的微孔膜中进行真空抽滤,然后将带有微生物的微孔膜用无菌剪刀剪成碎片,放入至上述离心沉淀的离心管中,与离心沉淀混合后制得固态微生物接种原料;
筛选异效碳源利用型协同抗盐菌群:将得到的固态微生物接种原料分成两份,分别接种在专化高盐缺碳液体培养基中,其中一份培养基中添加生物活性碳,另外一份添加生物惰性碳,筛选出异效碳源利用型协同抗盐菌群;
筛选促根抗盐的碳氮磷协同菌群:将筛选出的异效碳源利用型协同抗盐菌群接种到专化溶磷缺氮液体培养基中,筛选出促根抗盐的碳氮磷协同菌群;
所述专化高盐缺碳液体培养基的配方为:磷酸氢二钾1.5886克、磷酸二氢钾0.3919克、二水氯化钙0.06克、七水硫酸镁0.48克、一水硫酸锰2.52克、七水硫酸亚铁0.014克、七水硫酸锌0.35克、五水硫酸铜0.35克、硼酸0.35克、二水钼酸钠0.065克、硫酸铵1.704克、氯化钠25克、去离子水1升、pH7.0;
所述专化溶磷缺氮液体培养基的配方为:葡萄糖12克、磷酸钙5.5克、七水硫酸镁0.2克、六水氯化镁4.5克、氯化钾0.25克、1.0毫升微量元素溶液、2.05% EDTA铁盐溶液5毫升、1.0毫升维生素溶液、氢氧化钾4.5克、去离子水1升、pH7.0;
所述植物根系为野生柽柳、结缕草和碱蓬的根系;
所述制备固态微生物接种原料步骤中使用的微生物活性保持型缓冲液的配方为:磷酸氢二钾0.6618克、磷酸二氢钾0.1633克、硫酸镁0.1克、氯化钠6.5克、无菌水1升、pH7.0。
2.如权利要求1所述的促根抗盐的碳氮磷协同菌群的筛选方法,其特征在于:在所述筛选异效碳源利用型协同抗盐菌群步骤中一份培养基中添加的生物活性碳由质量比为1:1的小麦和玉米秸秆组成,添加量为1.3克/升,一升的培养基中添加1.3克的生物活性碳源,所述的生物惰性碳为生物碳,其添加量为5克/升。
3.一种促根抗盐的碳氮磷协同菌剂的制备方法,其特征在于:将权利1-2任意一项所述的筛选方法筛选出的促根抗盐的碳氮磷协同菌群与微生物活性保持载体混合制备出促根抗盐的碳氮磷协同菌剂。
4.如权利要求3所述的促根抗盐的碳氮磷协同菌剂的制备方法,其特征在于:所述微生物活性保持载体的配方为每100克总载体中含有10克小麦秸秆、10克玉米秸秆、20克生物炭、50克花生饼粉、9.18克棉粕、0.5克蛋白胨、0.3克葡萄糖、0.02克七水硫酸镁。
5.一种促根抗盐的碳氮磷协同菌剂的应用,其特征在于:将采用权利要求3、4任意一项所述的制备方法制备得到的促根抗盐的碳氮磷协同菌剂在蔬菜育苗和栽培定植中根据需要添加,蔬菜育苗中的添加量为基质质量的6%;在作物定植后,该菌剂的施用量为400公斤/亩。
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