[发明专利]一种转氨酶、突变体及其生产L-草铵膦的应用

权利要求书

1.一种来源于假单胞杆菌（Pseudomonas fluorescens）的转氨酶，其特征在于所述转氨酶的氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示。

2.一种权利要求1所述转氨酶的编码基因，其特征在于所述编码基因核苷酸序列为SEQID NO：1所示。

3.一种权利要求2所述转氨酶的编码基因构建的重组基因工程菌。

4.一种权利要求1所述转氨酶在催化2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基) -丁酸合成L-草铵膦中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述的应用以含转氨酶编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂，以2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基) -丁酸为底物，以磷酸吡哆醛为辅酶，加入氨基供体，于pH值为6~9的缓冲液中构成转化体系，在30~50 ℃、600 rpm条件下反应，反应完全，将反应液分离纯化，获得L-草铵膦；所述氨基供体为L-谷氨酸、L-天冬氨酸或L-丙氨酸；所述转化体系中，催化剂的用量以湿菌体重量计为20~60 g/L，所述底物的初始浓度为20~100 mM，所述辅酶的用量为0.02~2 mM，所述氨基供体用量为10~80 mM。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述湿菌体按如下方法制备：将含有转氨酶基因的工程菌接种至含有终浓度50 μg/mL卡那霉素抗性的LB液体培养基，37 ℃、200 rpm下培养9 h，再以体积浓度1%接种量接种至新鲜的含有终浓度50 μg/mL卡那霉素抗性的LB液体培养基中，于37 ℃、150 rpm下培养至菌体OD₆₀₀达0.6~0.8，加入终浓度为0.1 mM的IPTG，28 ℃下诱导培养12 h后，4 ℃、8000 rpm离心10 min，弃去上清液，收集湿菌体。