[发明专利]一种羊肚菌菌种分离方法

说明书

本发明公开了一种羊肚菌菌种分离方法，属羊肚菌分离方法领域。利用这种方法，用特定规格透明长方体玻璃瓶作母种容器，按特定配方制得培养基。把基部带土的羊肚菌种菇削至见斑状菌肉，挑取0.3毫米见方菌土混合体，直接接菌到容器内培养基平面的后部。在特定温度下，经1‑2次提纯，即可得到羊肚菌纯菌丝体。与现有羊肚菌菌种分离方法相比，这种分离方法操作简单，成功率高，解决了羊肚菌生产中菌种分离成功率过低的技术瓶颈问题。

技术领域

本发明涉及羊肚菌菌种分离方法领域，涉及一种羊肚菌的菌种分离方法。

背景技术

羊肚菌（Morchella deliciosa Fr.）是一种珍稀食药用菌，因子实体花纹酷似羊肚得名，是世界四大名菌之一。其味道鲜美、营养丰富、医用价值高，含有18种氨基酸，其中8种氨基酸是人体不能制造的，有 “蘑菇皇后”之称，具有珍贵的食用价值和突出的经济价值，目前市场价高达2000元/公斤以上。

羊肚菌传统上主要靠采集野生品种，近几年，人工栽培面积不断扩张，但栽培技术尚不完善，特别是菌种分离技术，成功率不足10%。现有羊肚菌菌种分离技术存在的主要不足和缺陷，一是母种培养面面积太小，加大了菌丝提纯难度；二是种菇分离部位选取不当。现有技术是用菌柄或菌帽做分离材料，这一部位活性差，分离成功率很低；三是培养温度偏高，使羊肚菌菌丝相对于杂菌菌丝失去生长优势，无法有效提纯。羊肚菌菌种分离上的这一技术短板加大了羊肚菌种植风险和种植成本，使菌种分离技术成为产业发展的一大瓶颈。

发明内容

菌种分离技术是羊肚菌栽培的关键环节，为了保护我国珍贵的野生羊肚菌资源，保护生态环境，推动羊肚菌产业的商业化种植，降低种植风险和种植成本，本发明提供了一种安全、高效、成功率可达90%以上的羊肚菌菌种分离方法。

本发明是以如下技术方案实现的：一种羊肚菌菌种分离方法的具体步骤为：一种羊肚菌菌种分离方法，具体分离步骤如下：

步骤1） 选择母种容器：用长15厘米，宽6厘米，高4厘米，且瓶口为直径2.5厘米的高透明长方体玻璃瓶作母种容器；该母种容器设计与试管容器相比，有五大优势：一是方便对瓶内菌丝体观察、判断和记录；二是使菌丝体伸展有足够的空间；三是便于菌丝体的提纯复壮；四是培养基厚度一致，便于扩繁时发菌速度的一致性；五是菌丝体有效面积大，省工省时，有利于规模化生产。

步骤2） 备制母种培养基：各原料及其用量为：纯净水1100毫升，新鲜去皮土豆200克，小麦50克，琼脂20克，葡萄糖18克，磷酸二氢钾0.2克，硫酸镁0.1克，维生素B1为3毫克；

母种培养基的制备方法为：在不锈钢锅里加水1100毫升，把新鲜去皮土豆200克切成0.5厘米薄片，和50克小麦一起加入水中，小火煮沸15分钟后过滤，取滤汁1000毫升，加入20克琼脂，小火煮至完全融化，然后加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和维生素B1，得到母种培养基，即可装入母种容器，每瓶母种容器装母种培养基20毫升，用棉塞或透气胶塞封口，放入灭菌锅，在120°C保持15分钟后取出，平放进超净工作台或其它无菌处，凝固待用。

步骤3）挑选种菇：种菇的主要标准，一是要在头潮菇中选择；二是种菇的商品性和农艺性状要突出；三是子实体健壮、无畸形、无病虫害；四是选择6-8成熟的子实体；另外，种菇要带基质土一起拔出，在采摘后2小时内进行分离培养。

步骤4）母种分离方法：首先用刀片把种菇基部的土壤削至见60-70%菌肉，在无菌条件下，挑取种菇基部的菌肉和基质土混合物0.3立方厘米的方块，过酒精灯火焰后接入备好的母种培养基平面，靠底部放置，封口后培养。