[发明专利]一种羊肚菌菌种分离方法

权利要求书

1.一种羊肚菌菌种分离方法，其特征在于：具体分离步骤如下：

步骤1） 选择母种容器：用长15厘米，宽6厘米，高4厘米，瓶口直径为2.5厘米的高透明长方体玻璃瓶作母种容器；

步骤2） 制备母种培养基：各原料及其用量为：纯净水1100毫升，新鲜去皮土豆200克，小麦50克，琼脂20克，葡萄糖18克，磷酸二氢钾0.2克，硫酸镁0.1克，维生素B1为3毫克；

母种培养基的制备方法为：在不锈钢锅里加水1100毫升，把新鲜去皮土豆200克切成0.5厘米薄片，和50克小麦一起加入水中，小火煮沸15分钟后过滤，取滤汁1000毫升，加入20克琼脂，小火煮至完全融化，然后加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和维生素B1，得到母种培养基，装入母种容器，每瓶装母种培养基20毫升，用棉塞或透气胶塞封口，放入灭菌锅，在120°C下保持15分钟后取出，平放进超净工作台或其它无菌处，凝固待用；

步骤3）挑选种菇：种菇的主要标准，一是要在头潮菇中选择；二是种菇的商品性和农艺性状突出；三是子实体健壮、无畸形、无病虫害；四是选择6-8成熟的子实体；种菇要带基质土一起拔出，在采摘后2小时内进行分离培养；

步骤4）母种分离方法：首先用刀片把种菇基部的土削至见60-70%菌肉，在无菌条件下，挑取种菇基部的菌肉和基质土混合物0.3立方厘米方块，过酒精灯火焰后接入备好的母种培养基平面，靠底部放置，封口后培养；

步骤5）菌丝培养与提纯：将做好分离的羊肚菌母种瓶放在提前消毒过的暗培养室培养，室内温度保持16°C，其室内空间相对湿度保持30-40%，培养 48-72小时；生长前端的菌丝体即是羊肚菌菌丝体；挑取前端的菌丝体接入新的母种培养基中，如此1-2次，即可获得羊肚菌纯菌丝体，即羊肚菌母种。

2.根据权利要求1所述的羊肚菌菌种分离方法，其特征在于：获得的羊肚菌母种进行保藏时，用于保藏母种的培养基，应将步骤2）中的母种培养基的pH调酸碱度至8，且每瓶装培养基30毫升，接入获得的羊肚菌母种，在母种菌丝布满瓶并形成菌核后，放入4℃冰箱保存。