[发明专利]一种用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的表达蛋白、ELISA试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物制品领域，具体讲，涉及一种用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的表达蛋白、ELISA试剂盒及其制备方法和应用。本发明涉及一种用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的表达蛋白，编码表达蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，该表达蛋白为上清蛋白。本发明还涉及用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的ELISA试剂盒，该ELISA试剂盒包括包被有该表达蛋白的ELISA板。本发明的试剂盒具有生物安全性高、成本低、符合率高、重复性好、特异性和敏感性高的技术优势。

技术领域

本发明涉及生物制品领域，具体讲，涉及一种用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的表达蛋白、ELISA试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrheavirus，BVDV)是导致牛病毒性腹泻病(bovine viraldiarrhea disease，BVD)的主要病原，主要感染牛，也感染猪、羊、骆驼等其他生物，宿主范围较广。临床上主要以腹泻、生长繁殖障碍、免疫抑制、急性或慢性黏膜病和持续性感染等症状为主。BVDV属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)，与瘟病毒属的另外两种猪瘟病毒及边界病病毒的同源性较高，具有结构相关性与抗原相关性，且存在血清学交叉反应。根据不同的分型标准，BVDV可分为一种血清型、两种生物型(致细胞病变型(cytopathic biotype，cp)和非致细胞病变型(non-cytopathic biotype，ncp)和三种基因型(BVDV-1型、BVDV-2型和BVDV-3型)。由于RNA病毒的高突变性及国内外、地区间的交流日益频繁，近年来部分地区分离出了新的亚型，基因型不断出现。

BVDV在世界范围内广泛流行。BVDV主要宿主为牛，牛感染BVDV后会出现一系列临床症状，直接影响牛的生长发育与繁殖，而牛感染BVDV后，部分牛群会出现免疫力下降等情况，这就给其他病原感染牛群造成了便利条件。随着养牛业规模化的发展，该病造成巨大损失，逐渐被人们熟知。因此，监测和防控该病显得尤为重要。实行严格的检疫、建立BVDV感染阴性种群作为防制BVD发生的有效措施，同时加强对健康牛群和可疑牛群的血清学监测，有针对性采取不同措施，减少BVD发生，为牛群养殖创造良好的条件。因此，对养殖群体定期进行抗体阳性动物筛选，不断淘汰清群或者制定合适的综合防御措施，避免动物群的感染发病，广泛而深入地开展BVD感染的流行病学调查，进行BVD检测技术的研究，研制和开发BVD抗体和抗原监测试剂盒，为BVD的防治提供技术支撑。

目前，国内外报到的BVDV检测方法分为抗体和抗原检测。抗体检测如酶联免疫吸附试验、中和试验、琼脂扩散试验等。抗原检测方法有病毒分离、RT-PCR技术、免疫荧光技术和核酸杂交技术等。病毒分离、血清中和实验、等方法耗时时费力，RT-PCR、电镜观察等需要专业人员，不适宜在牧区使用。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

鉴于背景技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的表达蛋白、ELISA试剂盒及其制备方法和应用。

本发明第一方面提出一种用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的表达蛋白，编码所述表达蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

可选的，所述表达蛋白为上清蛋白。

可选的，所述表达蛋白的制备方法至少包括以下步骤：

(1)查询牛病毒性腹泻病毒E2基因序列，根据大肠杆菌偏爱密码子表，对E2基因序列进行优化、增加信号肽序列并合成，得到优化后的SP-E2基因序列，所述SP-E2基因序列的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

(2)构建E2基因表达菌株：优化后的SP-E2基因的核苷酸序列连接到原核表达载体pET-32a(+)，得到重组质粒pET-32a-SP-E2，将构建好的重组质粒pET-32a-SP-E2转化至大肠杆菌BL21菌体中，构建得到SP-E2基因重组表达菌株；