[发明专利]一种用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的表达蛋白、ELISA试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的表达蛋白，其特征在于，编码所述表达蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述表达蛋白为上清蛋白；

所述表达蛋白的制备方法至少包括以下步骤：

(1)查询牛病毒性腹泻病毒E2基因序列，根据大肠杆菌偏爱密码子表，对E2基因序列进行优化、增加信号肽序列并合成，得到优化后的SP-E2基因序列，所述SP-E2基因序列的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

(2)构建E2基因表达菌株：优化后的SP-E2基因的核苷酸序列连接到原核表达载体pET-32a(+)，得到重组质粒pET-32a-SP-E2，将构建好的重组质粒pET-32a-SP-E2转化至大肠杆菌BL21菌体中，构建得到SP-E2基因重组表达菌株；

(3)表达蛋白的诱导表达和纯化：用IPTG诱导目的蛋白表达，纯化上清中的目的蛋白，获得用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的表达蛋白，并进行鉴定。

2.根据权利要求1所述的表达蛋白，其特征在于，在步骤(3)中，IPTG诱导目的蛋白表达的条件为：IPTG的浓度为0.3mmol/L；温度为37℃；诱导时间为9小时。

3.一种用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述ELISA试剂盒包括包被有权利要求1～2任一项所述的表达蛋白的ELISA板；

所述ELISA试剂盒还包括酶标抗体、样品稀释液、洗涤液、底物显色液、终止液、阳性对照血清和阴性对照血清。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，

所述酶标抗体选自HRP标记的兔抗牛IgG，所述样品稀释液选自0.5 wt％PEG 6000，所述底物显色液选自TMB，所述阳性对照液选自标准阳性血清，所述阴性对照血清选自标准阴性血清。

5.一种如权利要求3或4所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述ELISA试剂盒包括采用如下步骤制备的包被有用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的表达蛋白的ELISA板：

(1)用碳酸盐缓冲液作包被液，将用于检测牛病毒性腹泻病毒抗体的表达蛋白稀释为1μg/mL；按100μL/孔加入ELISA反应板中，在37℃封闭2小时；拍干，洗涤；所述碳酸盐缓冲液的pH为9.6；

(2)用10wt％PEG6000在37℃条件下封闭2小时或4℃过夜；洗涤，拍干，包装。