[发明专利]一种发酵制备棘孢菌素类抗生素的方法

说明书

本发明涉及一种利用拟无枝菌酸菌发酵制备棘孢菌素类抗生素的方法，其特点是通过发酵培养保藏登记号为CCTCC NO：M 2017189的一株拟无枝菌酸菌株（Amycolatopsis speibonae）YIM PH20520，再对其发酵产物进行萃取浓缩及分离纯化，得到分子量为223，分子式为C₁₀H₉NO₅的棘孢菌素以及分子量为207，分子式为C₁₀H₉NO₄的7‑去氧棘孢菌素，本发明为棘孢菌素类抗生素的生产制备提供了新方法、新途径。

技术领域

本发明涉及一种利用拟无枝菌酸菌发酵制备棘孢菌素类抗生素的方法，属于工业微生物领域 。

背景技术

棘孢菌素类抗生素包括化合物棘孢菌素（Echinosporin）和7-去氧棘孢菌素 （7-Deoxyechinosporin），它们的结构如式（I）所示。该类抗生素曾经从链霉菌菌株Streptomyces echinosporus MK-213、Streptomyces erythraeus Tü4015及Streptomycesalbogriseolus的发酵产物中分离得到，它们能够抑制肿瘤细胞的生长和诱导肿瘤细胞凋亡，对MCF7，K562，P388等肿瘤细胞株均有强抑制活性，同时对革兰氏阳性和阴性细菌也有一定的抑制作用。（Sato T et al :J. Antibiot.，1982，35(3)，266-271；Morimoto M et al :J. Antibiot.，1985，38(4)，490-495；Dübeler A et al :Eur. J.Org. Chem.，2002，983-987；Cui CB et al :Fitoterapia，2007，78(3)，238-240）。

现有技术中棘孢菌素类抗生素均由链霉菌发酵得到，经文献检索，未发现与本发明内容相同文献的公开报道，本发明为棘孢菌素类抗生素的生产制备提供了新方法、新途径。

式（I）

发明内容

本发明的目的是提供一种利用拟无枝菌酸菌YIM PH20520（Amycolatopsis speibonae YIM PH20520）发酵制备棘孢菌素类抗生素的方法 。

通过16S rRNA基因序列构建的系统进化树表明：用于发酵制备棘孢菌素类抗生素的生产菌株YIM PH20520与拟无枝菌酸菌属有效发表种Amycolatopsis speibonae JS72^T聚于同一进化分枝，它们的16S rRNA基因序列相似性为99.37%，表明菌株YIM PH20520属于拟无枝菌酸菌属的一种，将其命名为拟无枝菌酸菌YIM PH20520（Amycolatopsis speibonae YIM PH20520）。该菌株已于2017年4月11日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉市武汉大学，保藏号为CCTCC NO ：M2017189 。

本发明发酵制备棘孢菌素类抗生素的方法为：

(1)菌种液体种子培养：①液体种子培养基的制备 ：取酵母膏4.0g ；葡萄糖4.0g；麦芽膏5.0g ；复合维生素3.5mg ；加水至1000ml，pH 7.2，120°C灭菌30min ；②发酵 ：将菌株YIM PH20520接种到灭菌后的培养基中，28°C下于转速为220转/分钟的摇床上摇瓶发酵3天 。

(2)菌种发酵培养 ：①发酵培养基的制备：取淀粉20.0~30.0g ；牛肉膏1.0~5.0g；