[发明专利]一种发酵制备棘孢菌素类抗生素的方法

权利要求书

1.一种发酵制备棘孢菌素类抗生素的方法，其特征是该方法包括如下步骤:

(1)生产菌株为Amycolatopsis speibonae YIM PH20520，其保藏号为CCTCC NO：M2017189；

(2)菌种液体种子培养：

①液体种子培养基的制备:取酵母膏4.0g、葡萄糖4.0g、麦芽膏5.0g、复合维生素3.5mg、加水至1000ml，pH 7.2，120℃灭菌30min；②发酵:将菌株YIM PH20520接种到灭菌后的培养基中，28℃下于转速为220转/分钟的摇床上摇瓶发酵3天；

(3)菌种发酵培养：

①发酵培养基的制备:取淀粉20.0～30.0g、牛肉膏1.0～5.0g、葡萄糖0.5～1.5g、酵母膏3.0～7.0g、蛋白胨1.0～5.0g、CaCO₃ 2.0～6.0g、加水至1000ml，pH 7.0，120℃灭菌30min；②发酵：将上述步骤(2)中得到的菌株YIM PH20520种子液加到灭菌后的发酵培养基中，加菌种量为发酵培养基重量的10％，28℃下于转速为190～250转/分钟的摇床上摇瓶发酵5～7天；

(4)发酵液处理：

①发酵液经3000转/分钟离心，离心时间为20分钟；②以等体积乙酸乙酯萃取发酵上清液4次，回收溶剂后得到菌株发酵粗提物；③进行硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇体积比80：1至9：1梯度洗脱，得到Fr.1-Fr.5五个组分；④组分Fr.5经甲醇凝胶柱层析纯化得到单体化合物1，即为棘孢菌素；⑤组分Fr.3经甲醇凝胶柱层析纯化后，采用乙腈-水体积比55：45为流动相，用制备型HPLC制备得到单体化合物2，即为7-去氧棘孢菌素。

2.根据权利要求1所述的一种发酵制备棘孢菌素类抗生素的方法，其特征是所述步骤(3)中的淀粉为24.0g、牛肉膏为3.0g、葡萄糖为1.0g、酵母膏为5.0g、蛋白胨为3.0g、CaCO₃为4.0g。

3.根据权利要求1所述的一种发酵制备棘孢菌素类抗生素的方法，其特征是所述步骤(3)中的摇床转速为220转/分钟，所述摇瓶发酵时间为6天。