[发明专利]一种重组质粒pET28a-Ag43、表面展示质粒、重组工程菌及其应用

权利要求书

1.一种表面展示质粒，其特征在于，在重组质粒pET28a-Ag43的基础上将Ag43编码基因中的53-137aa或53～699aa切除，插入多克隆位点MCS；所述切除时的反应体系为目标基因片段或质粒DNA 1000ng，10×QuickCut缓冲液5μL，QuickCut酶I1～2μL，QuickCut酶II 1～2μL，总体系为50μL；所述插入多克隆位点MCS时的插入连接的反应体系为酶切目标基因片段与酶切质粒质量比为3:1,10×T4 DNA连接缓冲液2～3μL,T4 DNA连接酶2～3μL,总体系为20μL；所述重组质粒pET28a-Ag43中Ag43编码基因插入到质粒pET28a的EcoRI和HindIII多克隆位点处；所述Ag43编码基因具有序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

2.一种重组工程菌，其特征在于，包含权利要求1所述的表面展示质粒。

3.权利要求2所述的重组工程菌在工程菌表面展示表达外源蛋白中的应用；

所述外源蛋白为红色荧光蛋白、内切葡萄糖酶、甲酸脱氢酶或葡萄糖脱氢酶。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述表面展示表达外源蛋白的方法，包括如下步骤：

I)将权利要求2所述重组工程菌接种至含有50g/mL卡那霉素的LB培养基中，在36～38℃，180～220rpm，振荡培养0.6～0.8h后加入IPTG诱导剂，得到待诱导的重组工程菌菌液；

II)将所述步骤I)的待诱导的重组工程菌菌液的温度降低至21～23℃，诱导培养15～17h后离心，收集沉淀物。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述IPTG诱导剂在待诱导的重组工程菌菌液中的浓度为95～105μmol/L。