[发明专利]一种产生NO的pH敏感脂质体及其制备方法

说明书

本发明公开了一种产生NO的pH敏感脂质体及其制备方法，其是通过静电作用将pH敏感性聚合物PEG‑PLL‑DMA包覆在脂质体表面，并于脂质体内水相负载亲水性NO供体，由磷脂双分子层包载疏水性抗肿瘤药物，以构建具有肿瘤组织微环境pH敏感性以及可在肿瘤细胞内产生NO的脂质体。

技术领域

本发明属于生物医用材料技术领域，具体涉及一种产生NO的pH敏感脂质体及其制备方法。

背景技术

肿瘤细胞多药耐药性的产生是肿瘤治疗失败的重要原因。关于肿瘤细胞的耐药机制，目前比较流行的观点是P-糖蛋白（P-gp）介导的药物外排。NO是一种气体分子信使，其在各种生理过程中起着关键作用。更重要的是，NO可以下调P-gp的表达水平，从而起到逆转肿瘤多药耐药性的作用。据报道，NO供体在肿瘤细胞内可通过酶、酸性、氧化还原、光等刺激产生NO，但是NO供体存在生理稳定性差、缺乏靶向性和组织特异性、药物作用时间过短等问题，从而限制了其作为P-gp抑制剂的应用。

脂质体是一种由磷脂组成的双分子层结构囊泡，其具有良好的生物相容性和生物利用度，可以同时包载脂溶性和水溶性的药物小分子。pH敏感性脂质体可在肿瘤组织或肿瘤细胞的酸性pH条件下促发药物释放。本发明结合具有肿瘤微环境（pH=6.5）pH敏感的聚合物PEG-PLL-DMA和NO供体可自发产生NO的特点，构建可产生NO的pH敏感脂质体，使其具有在肿瘤组织微环境中可发生电荷翻转并自发产生NO的特性，提高疗效。

发明内容

本发明的目的在于提供一种产生NO的pH敏感脂质体，该脂质体在肿瘤组织微环境可发生电荷翻转以促进肿瘤细胞对脂质体的摄取，并可同时产生NO，以抑制P-gp介导的药物外排，逆转肿瘤多药耐药性。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种产生NO的pH敏感脂质体，该脂质体的磷脂层中包含了胆固醇（Chol）、氢化大豆卵磷脂（HSPC）、1,2-二硬脂酸-3-磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-PEG₂₀₀₀）、(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺（DOTAP）和疏水性抗肿瘤药物，内水相中包载了亲水性NO供体，并通过静电作用将pH敏感性聚合物聚乙二醇-聚赖氨酸-二甲基马来酸酐（PEG-PLL-DMA）包覆在脂质体表面。

其中，HSPC、Chol、DSPE-PEG₂₀₀₀、DOTAP和疏水性抗肿瘤药物的摩尔比为12:1:1:(0.3~10):(0.1~5)。所述疏水性抗肿瘤药物为紫杉醇、多烯紫杉醇、喜树碱和长春新碱中的任意一种。

HSPC、DOTAP及DSPE-PEG₂₀₀₀的质量之和与所用亲水性NO供体的质量之比为10:1~120:1。所述亲水性NO供体为二亚乙基三胺NO亲核复合体（DETA NONOate）、聚壬二酐NO亲核试剂（PAPA NONOate）和精胺氮氧化加合物（Spermine NONOate）中的任意一种。

HSPC、DOTAP及DSPE-PEG₂₀₀₀的质量之和与所用PEG-PLL-DMA的质量之比为1:1~1:30。

所述产生NO的pH敏感脂质体的制备方法包括以下步骤：

（1）将HSPC、Chol、DSPE-PEG₂₀₀₀、DOTAP和疏水性抗肿瘤药物溶解于氯仿溶液中；

（2）通过旋转蒸发法除去氯仿溶液，得到均匀的膜状材料；

（3）用pH=8.0含0.5~3 mM亲水性NO供体的PBS缓冲溶液洗脱后，再采用超声波细胞破碎仪，在功率为100~400 W的条件下超声处理5-20 min，以形成包载有NO供体和抗肿瘤药物的脂质体；

（4）加入PEG-PLL-DMA，室温搅拌5 min~8 h，即得所述产生NO的pH敏感脂质体。