[发明专利]一种蛋白质组装体及其制备方法有效
| 申请号： | 201810506122.6 | 申请日： | 2018-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN108640980B | 公开（公告）日： | 2020-12-11 |
| 发明（设计）人： | 牛忠伟;高偲嘉;田野 | 申请（专利权）人： | 中国科学院理化技术研究所;中国科学院大学 |
| 主分类号： | C07K14/08 | 分类号： | C07K14/08 |
| 代理公司： | 北京正理专利代理有限公司 11257 | 代理人： | 白凤莹 |
| 地址： | 100190 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白质 组装 及其 制备 方法 | ||
1.一种蛋白质组装体，其特征在于，所述蛋白质组装体是由氟尾修饰的病毒纳米粒子衣壳蛋白自组装而成的具有囊泡结构的蛋白质组装体，所述氟尾为含7个氟原子的全氟碳氟链，分子式通式为-CH2(CF2)2CF3；
具体通过包括如下步骤的方法制备：
将病毒纳米粒子均匀分散在中性缓冲溶液中，搅拌，形成反应溶液一；
向反应溶液一中加入1-羟基苯并三唑溶液和氟尾溶液，搅拌，形成反应溶液二；
向反应溶液二中分次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，搅拌，形成反应溶液三；
反应溶液三进行透析，得到表面修饰氟尾的病毒纳米粒子；
将表面修饰氟尾的病毒纳米粒子加入乙酸溶液中，静置后离心，取上清液；
上清液进行脱盐，对脱盐后的溶液进行检测并收集含有蛋白的部分；
含有蛋白的部分进行透析，等电点沉淀后离心，取沉淀；
沉淀用KOH溶液复溶后透析，得到修饰氟尾的病毒衣壳蛋白；
将修饰氟尾的病毒衣壳蛋白进行透析，即得蛋白质组装体。
2.根据权利要求1所述的蛋白质组装体，其特征在于，所述病毒纳米粒子衣壳蛋白选自烟草花叶病毒衣壳蛋白、豇豆花叶病毒衣壳蛋白、M13噬菌体衣壳蛋白、T2噬菌体衣壳蛋白中任意一种。
3.根据权利要求1所述的蛋白质组装体，其特征在于，所述蛋白质组装体的尺寸为30-200nm。
4.一种如权利要求1-3任一所述的蛋白质组装体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将病毒纳米粒子均匀分散在中性缓冲溶液中，搅拌，形成反应溶液一；
向反应溶液一中加入1-羟基苯并三唑溶液和氟尾溶液，搅拌，形成反应溶液二；所述氟尾为含7个氟原子的全氟碳氟链，分子式通式为-CH2(CF2)2CF3；
向反应溶液二中分次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，搅拌，形成反应溶液三；
反应溶液三进行透析，得到表面修饰氟尾的病毒纳米粒子；
将表面修饰氟尾的病毒纳米粒子加入乙酸溶液中，静置后离心，取上清液；
上清液进行脱盐，对脱盐后的溶液进行检测并收集含有蛋白的部分；
含有蛋白的部分进行透析，等电点沉淀后离心，取沉淀；
沉淀用KOH溶液复溶后透析，得到修饰氟尾的病毒衣壳蛋白；
将修饰氟尾的病毒衣壳蛋白进行透析，即得蛋白质组装体。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述病毒纳米粒子的浓度为0.1mg/ml-10mg/ml。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述反应溶液一、1-羟基苯并三唑溶液、氟尾溶液中溶质的物质的量之比为1:10-200:10-250。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述反应溶液二与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液中溶质的物质的量之比为1:10-200。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述表面修饰氟尾的病毒纳米粒子与乙酸溶液的体积比为1:1-3。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述KOH溶液的离子强度为10mM-500mM。
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