[发明专利]一种基于驼源抗PPRV cDNA文库及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种基于驼源抗PPRV cDNA文库及其制备方法和应用，属于生物技术领域。其利用PPRV弱毒苗及浓缩、纯化弱毒苗制备抗原免疫骆驼，获得高质量免疫血清及全血；利用两端分别带有SfiIA、SfiIB酶切位点引物逆转录外周血淋巴细胞提取的总mRNA，合成全长cDNA第一链，PCR扩增，SfiI单酶切后定向插入特定载体pGADT7‑SfiI，获得基于驼源抗小反刍兽疫病毒抗体cDNA文库。经鉴定：文库库容约2.0×10⁶cfu/mL，插入片段约400bp～2kbp，平均长度约1Kbp，多样性好，重组率约100%；功能性分析表明：所构建的cDNA文库中存在具有中和活性抗小反刍兽疫病毒VHH抗体。本发明的提出为筛选抗小反刍兽疫病毒VHH抗体提供了平台，为小反刍兽疫的早期治疗和诊断提供了新的技术手段。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种基于驼源抗PPRV cDNA文库及其制备方法和应用。

背景技术

小反刍兽疫（peste des petites ruminants，PPR）又名小反刍兽假性牛瘟、肺肠炎、口炎肺肠炎复合症，是由小反刍兽疫病毒（peste des petites ruminants virus，PPRV）引起小反刍动物急性、热性、高度接触性传染病。PPR于1942年首次在西非报道，随后流行于撒哈拉沙漠与赤道之间的大多数非洲国家，后来，其分布扩大到中东、伊朗、南亚次大陆、土耳其以及亚洲中部的部分国家，在亚洲，PPR于1987年首次在印度南部地区出现，1993-1995年传入阿拉伯半岛、中东及南亚次大陆部分地区并成为了当地的地方性流行病。2007年，PPR首先传入我国西藏，2013年年底扩散至新疆，疫情传播快、跨度大、风险高，仅仅两个月，就在甘肃、内蒙、宁夏、湖南、辽宁、安徽和重庆7个省份发生，截止2014年年底疫情已蔓延近22个省份，261个县，总体由西向东扩散(张容萍,王薇,刘佳升,等.云南红河州小反刍兽疫的血清学及分子流行病学调查[J].动物医学进展，2018,39（1）:79-84.)，对我国畜牧业生产和动物疫病防控造成威胁，严重影响我国国际贸易和经济发展。要预防和控制该病，明确该病毒的致病机理，需从病毒的功能性抗体入手，单域抗体（VHH）是目前可以获得具有结构稳定、功能完整、可结合抗原的最小结构单元，由于其免疫原性低、易表达、亲和力高、耐热等特点成为当前分子影像研究的重要靶标分子。因此如何成功获得特异性针对小反刍兽疫病毒的功能性VHH抗体是解决该问题的关键，而构建针对小反刍兽疫病毒VHH抗体cDNA文库是突破口。