[发明专利]一种铁皮石斛叶总黄酮的提取与纯化方法

说明书

本发明公开了一种铁皮石斛叶总黄酮的提取与纯化方法，它包括以下步骤：将铁皮石斛叶与乙醇水溶液混合，回流提取，过滤，滤液蒸发浓缩，所得浓缩液先后使用石油醚和正丁醇萃取，所得萃取液浓缩，配制成去离子水溶液，上大孔树脂进行吸附富集，再以乙醇水溶液洗脱，洗脱流出液浓缩，即得铁皮石斛叶总黄酮产品；本发明提取纯化后的总黄酮不含有害杂质，且生物活性较好，该方法大孔树脂可以再生，重复使用，蒸发浓缩所得乙醇也可以重复利用，过程产生废液污染少。

技术领域

本发明属于天然产物分离、保健食品、医药技术领域，具体涉及一种铁皮石斛叶总黄酮的提取与纯化方法。

背景技术

现代研究表明，总黄酮具有降低血压、降血脂、免疫调节、清除自由基等多种生物活性，特别对于收缩压、舒张压升高具有显著的抑制作用。此外，总黄酮对人体的正常细胞低毒甚至无毒，因此总黄酮在人类保健、营养和疾病预防及治疗方面具有广阔的应用前景。

铁皮石斛是一种名贵中药材，为兰科植物Dendrobium officinale KimuraetMigo的干燥茎，为九大仙草之首。具有益胃生津、滋阴清热等传统功效，并有保肝，调节代谢异常等现代功能。铁皮石斛主要含多糖、黄酮、生物碱、氨基酸等有效成分。根据2015版药典明文规定，铁皮石斛的药用部位为茎，其叶既不属于药用部位，也不能作为普通食品使用，故铁皮石斛的叶部位通常被废弃，造成叶资源大量浪费；2017年2月铁皮石斛叶已向中国CFDA申报新食品原料并受理。本课题前期研究证实铁皮石斛叶和铁皮石斛茎中具有相同的黄酮结构，且叶中黄酮含量远胜于茎中。铁皮石斛叶中已经得到指认的8种黄酮碳苷类化合物均以芹菜素为苷元的黄酮二碳糖苷类化合物，过去对黄酮类化合物的研究主要集中在黄酮氧苷等，对黄酮碳苷的研究相对较少。研究证明黄酮碳苷具有抗氧化、保护心血管等作用，具有广泛的药理活性，具有深入研究意义。

目前总黄酮的提取方法主要有直接回流法、超临界流体萃取法、微波法等。铁皮石斛叶中总黄酮含量相对较低，若直接采用超临界流体萃取技术，过度消耗流体，从经济效益来看非常不合算，微波法需特殊的仪器，一次性成本投入高；直接回流法与临界流体萃取法、微波法相比，综合成本较低，且乙醇可以回收重复利用。同时，采用大孔树脂富集分离总黄酮。因为大孔吸附树脂的物理化学稳定性高，吸附选择性强，富集效果好，解吸条件温和，再生简便，使用周期长等特点，所以近些年来，树脂吸附法被广泛应用于天然产物的分离纯化。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从铁皮石斛叶中提取和纯化总黄酮的方法，该法操作简便，提取率高且成本低廉。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施:一种铁皮石斛叶总黄酮的提取与纯化方法，包括以下步骤：

（1）醇提：将干燥铁皮石斛叶粉粹，加入乙醇水溶液加热回流提取30min～60min，回流提取温度控制在60～85℃，然后过滤收集滤液，上述提取重复2到3次。

（2）合并滤液，减压浓缩至无醇味，即得到铁皮石斛叶醇提物。

（3）萃取：将上述提取物放入分液漏斗中，先用石油醚提取，萃取比1:0.5~2，重复1~5次，再用正丁醇溶液提取，萃取比1:0.5~2，重复1~5次，收集正丁醇相，减压浓缩得到浸膏，用去离子水复溶得到铁皮石斛叶正丁醇部位提取物。

（4）纯化：上述铁皮石斛叶正丁醇部位提取物经大孔树脂吸附D101、DM130、ADS-17和NKA-9中的任一种，上样后静置时间10~60min，以体积1~10BV的去离子水水洗至流出液颜色接近无色，再以5~20%乙醇洗脱液，体积1~10BV，0.1～5 mL/min流速洗脱除去杂质，最后以30~70%乙醇洗脱液，体积1~10BV，0.1～5 mL/min流速洗脱大孔吸附树脂，得到洗脱液。

（4）将洗脱液20～55℃减压浓缩至无醇味，得到铁皮石斛叶总黄酮提取物。