[发明专利]用于流式细胞仪的数据处理方法

说明书

本发明公开了一种用于流式细胞仪的数据处理方法，包括以下步骤：预先获取探测器增益实际值与探测器增益控制值之间的增益映射关系；采集流式细胞仪原始数据，记录探测器增益控制值；计算探测器增益实际值；采用补偿算法或归一算法对流式细胞仪原始数据进行运算处理，得到新的流式细胞仪数据。本发明通过系统初始荧光矩阵，可以获得任意增益条件下的荧光补偿矩阵(同组染料)，避免多次进行复杂的荧光补偿操作，有效降低了试剂的使用量和实验时间。并且所有的测试数据都归一化到特定增益倍数条件下的数据，这样所有的测试数据均可以进行横向比较，方便数据的挖掘。本发明具有很大的时间效益和经济效益，具有很好的推广应用价值。

技术领域

本发明涉及数据处理领域，特别涉及一种用于流式细胞仪的数据处理方法。

背景技术

流式细胞仪是一种可以对细胞，或者一些特殊微粒(如聚苯乙烯微球)的特性(如大小，折射率，内部结构的复杂程度等)进行快速分析的仪器。在含有细胞的样本被鞘液压缩聚焦，进入流体池中后形成层流，细胞被压缩在样本流线上，一个一个地通过激光光斑，使用探测器在光轴方向的前方和光轴的90°方向测试细胞经过激光光斑产生的散射光，以及所携带的荧光染料产生的特异性荧光，从而测试细胞的一些特性。

流式细胞仪记录的数据通常包括前向散射光强度，侧向散射光强度，荧光强度等数据。获取这些数据主要通过光电二极管，雪崩二极管或者光电倍增管等手段，通常为了达到一定的动态范围，这个探测器的增益都是可变的，因此测量得到的数据大小由光信号的大小和探测器的增益共同决定。因此探测器的增益值设置为不同值时，所测量的数据不具有可比性，也因此造成不同增益条件下的补偿矩阵也不同。

在公开的商用流式细胞仪中，仍然存在这些问题。这些流式细胞仪测试过程中，要求数据测量采用同一配置，即增益等参数相同，所测量的数据才具备可比性。这些仪器也具备增益控制功能，但是，这些增益控制值和增益之间并没有准确的映射关系，而且探测器之间的差异性也导致传统的仪器无法实现归一化的功能。

参照图4，四个探测器分别探测阴影部分的光谱所对应的光强，显然对染料1除了探测器3可以测得该染料的信号以外，探测器4也可以测得该染料的部分信号，而染料2只有探测器4可以测得信号，所以探测器4所测量得到的信号由于含有染料1的光强成分，所以会导致染料2的结果不准确，因此碰到染料光谱有重叠的情况，流式细胞仪的数据需要进行补偿。假设探测器3的测量值I₃，探测器4对染料1的响应和探测器3对染料1的响应比例系数a₁(该系数通过只有染料1时探测器的响应测试得到)，探测器4的总响应I₄，则探测器4对染料2的响应I₄₂通过下式进行校正。

I₄₂＝I₄-I₃*a₁，

但是这一结论成立的前提是以后所有的测量数据其探测器的增益必须保持不变，或是更准确的说是探测器4对染料1的响应和探测器3对染料1的响应之间的比例系数a1保持不变，否则上式不成立，结果就无法补偿。这是最简单的情况，如果涉及多光谱重叠，还需要通过矩阵计算。

商用的流式细胞仪，如BD公司的流式细胞仪，其补偿功能必须是在增益条件不变的情况下才能见效，增益发生变化，染料的荧光在各通道的响应就发生了变化，原来的补偿矩阵就会失效。

总之，现有的商用流式细胞仪和公开的资料显示，流式细胞仪存在不同增益条件下测试的数据不可进行比较，不同增益条件下测试的数据，需要重新在该增益条件下进行荧光补偿两方面的不足，造成流式数据挖掘困难，重复补偿增加使用难度，增加运营成本，浪费时间。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种用于流式细胞仪的数据处理方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于流式细胞仪的数据处理方法，包括以下步骤：