[发明专利]一种核酸适体生物传感器及其制备与应用

权利要求书

1.一种核酸适体生物传感器，其特征在于所述传感器以金电极为基底，在基底表面自组装3～巯基丙酸，然后再在3～巯基丙酸上偶联氨基修饰的核酸适体。

2.如权利要求1所述核酸适体生物传感器，其特征在于所述金电极先经过清洗处理再用于基底，所述清洗方法为：将金电极依次采用粒径为1.00μm、0.30μm和0.05μm氧化铝粉打磨抛光，用二次去离子水将金电极表面清洗干净后，再分别用无水乙醇和二次去离子水将金电极超声清洗两次，每次5min；将二次去离子水超声后的金电极吹干后置于0.2-0.5M的H₂SO₄水溶液中，在电压0-1.6V、扫描速度100mV/s的条件下进行循环伏安扫描，直到循环伏安曲线稳定，取出金电极用二次去离子水冲洗去掉电极上残留的H₂SO₄，吹干后，获得清洗后的金电极。

3.如权利要求2所述核酸适体生物传感器，其特征在于所述H₂SO₄水溶液浓度为0.5M。

4.如权利要求1所述核酸适体生物传感器，其特征在于所述3～巯基丙酸自组装方法为：将金电极置于100～200mM的3-巯基丙酸乙醇溶液中，室温下避光孵育6～8h，用无水乙醇清洗金电极表面未结合的3-巯基丙酸，吹干，获得3-巯基丙酸修饰的金电极。

5.如权利要求1所述核酸适体生物传感器，其特征在于所述氨基修饰的核酸适体偶联方法为：将表面自组装3～巯基丙酸的基底置于偶联反应体系中，室温下反应40～60min，用二次去离子水将未结合的氨基修饰的核酸适体洗去，获得核酸适体电化学生物传感器；所述偶联反应体系组成为：20mM吗啉乙磺酸、20mM 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、20mM N-羟基丁二酰亚胺和100～200nM氨基修饰的核酸适体，溶剂为结合缓冲液；所述结合缓冲液组成为：NaCl 120mM，KCl 5mM，MgCl₂1mM，CaCl₂1mM，Tris 50mM，pH7.4。

6.如权利要求5所述核酸适体生物传感器，其特征在于所述所述氨基修饰的核酸适体中核酸适体核苷酸序列为：

ATGAGAGCGTCGGTGTGGTATCGCCGCGCTGGCCGATCGTTCCTCCCCCCCCGTGTGTAGGAGGGTGCGAAGTA。

7.一种权利要求1核酸适体生物传感器的制备方法，其特征在于所述方法为：(1)将金电极依次采用粒径1.00μm、0.30μm和0.05μm氧化铝粉打磨抛光，用二次去离子水将金电极表面清洗干净后，再分别用无水乙醇和二次去离子水将电极超声清洗两次，每次5min；将二次去离子水超声后的金电极吹干后置于0.2-0.5M的H₂SO₄水溶液中，在电压0-1.6V、扫描速度为100mV/s的条件下进行循环伏安扫描，直到循环伏安曲线稳定，取出金电极用二次去离子水冲洗去掉电极上残留的H₂SO₄，吹干，获得清洗后的金电极；(2)将清洗后的金电极置于100～200mM的3-巯基丙酸乙醇溶液中，室温下避光孵育6～8h，用无水乙醇清洗金电极表面未结合的3-巯基丙酸，吹干，获得3-巯基丙酸修饰的金电极；(3)将表面自组装3～巯基丙酸的基底置于偶联反应体系中，室温下反应40～60min，用二次去离子水将未结合的氨基修饰的核酸适体洗去，获得核酸适体电化学生物传感器；所述偶联反应体系组成为：20mM吗啉乙磺酸、20mM 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、20mM N-羟基丁二酰亚胺和100～200nM氨基修饰的核酸适体，溶剂为结合缓冲液；所述结合缓冲液组成为：NaCl 120mM，KCl 5mM，MgCl₂1mM，CaCl₂1mM，Tris 50mM，pH7.4。

8.一种权利要求1所述核酸适体生物传感器在检测内毒素中的应用。