[发明专利]椰子胚诱导培养基和基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法

权利要求书

1.一种基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用镊子和解剖刀将胚从消毒的固体胚乳块中分离出胚，用刀片将胚乳切成1mm厚的薄片，将胚切片接种到初代诱导培养基上初代培养，得到初代胚薄片；

所述初代诱导培养基以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基还含有的组分为4mg/L 2,4-D、1mg/L或1.5mg/L NAA、质量浓度为3％蔗糖、质量浓度为0.5％琼脂和0.1％活性炭；所述初代诱导培养基的pH值为5.5～5.8；所述初代培养的温度25～28℃；所述初代培养为全暗培养；所述初代培养的时间为15～20d；

(2)将所述步骤(1)中初代胚薄片接种到胚诱导培养基上进行诱导培养，得到芽；

所述椰子胚诱导培养基，以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还含有的组分为0～1mg/L 2,4-D，1mg/L、0.8mg/L或0.5mg/L的麦草畏，0.2mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L或1mg/L NAA，质量浓度为3％～6％蔗糖，质量浓度为0.35％～0.5％琼脂和质量浓度为0.1％～0.23％活性炭；所述椰子胚诱导培养基的pH值为5.5～5.8；

所述改良的Y3培养基是在Y3培养基基础上对如下组分含量进行调整得到：0.025～0.25mg/L CuSO₄·5H₂O，25～56mg/L Na₂·EDTA和12～45mg/L FeSO₄·7H₂O；

所述诱导培养为光照培养，光照的时长10～12h/d；光照强度为1000～1500lx；所述诱导培养的温度为25～28℃；

(3)将所述步骤(2)中的芽切片接种至增殖培养基上增殖培养，再转接到所述的胚诱导培养基上再次诱导培养，得到胚芽；

所述增殖培养基以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还含有的组分为5mg/L麦草畏、0.2mg/L NAA、质量浓度为3％蔗糖、质量浓度为0.5％琼脂和质量浓度为0.1％活性炭；所述增殖培养基的pH值为5.5～5.8；

所述增殖培养的温度为25～28℃；所述增殖培养为全暗培养；所述增殖培养的时间为15～20d；

所述再次诱导培养为光照培养；光照的时长为12～15h/d，光照强度为1000～1500lx，所述再次诱导培养的温度为25～28℃；

(4)将所述步骤(3)中的胚芽接种到生根培养基上进行生根培养，得到椰子组培苗；

所述生根培养基以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还含有的组分为0.2mg/L GA3、质量浓度为6％蔗糖、质量浓度为0.5％琼脂和质量浓度为0.1％活性炭；所述生根培养基的pH值为5.5～5.8；

所述生根培养是先进行全暗培养3～7d，然后进行光暗交替培养38～45h；光照的时长为10～12h/d，光照强度为2000～2500lx；

所述生根培养的温度为25～28℃；

(5)将所述步骤(4)中的椰子组培苗置于自然光照下炼苗10～15d后，洗净根部培养基，移栽至再生基质中培养，得到椰子再生植株；

所述再生基质包括体积比为2～4：1的红土和河沙；

所述改良的Y3培养基是在通用培养基Y3培养基基础上对如下组分含量进行调整得到：0.025～0.25mg/L CuSO₄·5H₂O，25～56mg/L Na₂·EDTA和12～45mg/L FeSO₄·7H₂O。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中消毒的方法如下：将所述固体胚乳块在1号消毒液中浸泡5～10s，然后用体积浓度为2号消毒液中消毒8～20min，再用无菌水清洗3～5次；

所述1号消毒液为体积浓度70％～80％乙醇水溶液；

所述2号消毒液为体积浓度0.1％升汞溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中接种至胚诱导培养基上的接种量为16～30个/皿。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中固体胚乳块采集自授粉10～14个月的成熟椰子果实。