[发明专利]椰子胚诱导培养基和基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法

说明书

本发明提供了椰子胚诱导培养基和基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法，属于椰子组织培养技术领域。椰子胚诱导培养基，以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还包含2,4‑D，麦草畏，NAA，蔗糖，琼脂和活性炭；所述椰子胚诱导培养基的pH值为5.5～5.8。本发明以椰子合子胚为外植体，经过外植体消毒、细胞薄层培养、胚的诱导、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了椰子组织培养快速繁殖体系，为椰子产业持续提供优质椰子组培苗，促进椰子产业升级换代具有重要的意义。

技术领域

本发明属于椰子组织培养技术领域，具体涉及椰子胚诱导培养基和基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法。

背景技术

椰子(Cocos nucifera L.)是棕榈科椰子属多年生乔木，是典型的热带木本油料作物和食品作物，是世界热带地区重要的经济作物。目前我国椰子的产量只能满足总需求量的10％左右，供需矛盾突出，因此急需要加快椰子种植产业的发展。

然而椰子多为异花授粉植物，生长周期长，繁殖系数低，杂种后代性状分离严重，个体间差异较大，很难获得同一性状的后代群体，同时椰子只有一个独立的茎干而不产生分枝，因而常规的营养繁殖手段如扦插、嫁接、高空压条等无法用于椰子的无性繁殖，因此有必要通过建立完整、高效、实用的椰子组培快繁技术体系，实现椰子优良无性品系培育，为推广优质椰子组织培养苗大规模繁育提供技术支撑。

目前，对于椰子组织培养技术而言，尚无成功的植株再生案例，只能借鉴其他物种的植株再生技术进行摸索和研究，但是不同物种遗传背景和生活环境差异巨大，对椰子的组织培养技术的研发帮助甚微。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供椰子胚诱导培养基和基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法，具有高效的胚芽诱导率，从而建立了椰子组织培养快速繁殖体系。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种椰子胚诱导培养基，以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还包含0～1mg/L 2,4D，0～1mg/L麦草畏，0～1mg/L NAA，质量浓度为3％～7％蔗糖，质量浓度为0.35％～0.5％琼脂和质量浓度为 0.1％～0.25％活性炭；所述椰子胚诱导培养基的pH值为5.5～5.8；

所述2,4D、麦草畏和NAA的浓度不同时为0；

所述改良的Y3培养基是在Y3培养基基础上对如下组分含量进行调整得到：0.025～0.25mg/L CuSO₄·5H₂O，25～56mg/L Na₂·EDTA和12～45mg/L FeSO₄·7H₂O。

优选的，基本培养基中还包含0.3～0.8mg/L 2,4D、0.3～0.8mg/L麦草畏、 0.3～0.8mg/L NAA、质量浓度为4％～6％蔗糖、质量浓度为0.4％～0.45％琼脂和质量浓度为0.18％～0.23％活性炭。

本发明提供了一种基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法，包括以下步骤：

(1)从消毒的固体胚乳块中分离出胚，将得到的胚切片接种到初代诱导培养基上初代培养，得到初代胚薄片；

所述初代诱导培养基以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还包含0～4mg/L 2,4D、0～10mg/L麦草畏、0～1mg/L NAA、质量浓度为3％～7％蔗糖、质量浓度为0.35％～0.5％琼脂和0.1％～0.25％活性炭；所述初代诱导培养基的pH值为5.5～5.8；所述2,4D、麦草畏和NAA的浓度不同时为0；

所述初代培养的温度25～28℃；所述初代培养为全暗培养；所述初代培养的时间为15～20d；