[发明专利]一种泥鳅精子的超低温冷冻保存液及其冷冻复苏方法和应用在审
| 申请号： | 201810494375.6 | 申请日： | 2018-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN108552161A | 公开（公告）日： | 2018-09-21 |
| 发明（设计）人： | 周小云;罗双双;呼光富;祝东梅 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 龚莹莹 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 泥鳅 精子 复苏 超低温冷冻保存 受精 冷冻 冷冻保存技术 遗传育种研究 规模化生产 显著性差异 超低温 冷冻保存 雄性个体 仪器设备 鱼类精子 孵化率 泥鳅苗 受精率 精卵 应用 便利 生产 | ||
【权利要求书】：
1.一种泥鳅精子的超低温冷冻保存液，包括：
450-500mg NaCl，650-700mgKCl，20-25mg CaCl2，10-15mg MgSO4，200-250mg Tris，400-600mg 甘氨酸，90-92mL ddH2O，4-6mL乙二醇，4-6mLDMSO。
2.根据权利要求1所述冷冻保存液，其特征在于：480mg NaCl，680mgKCl，22mg CaCl2，12mg MgSO4，240mg Tris，500mg甘氨酸，90mL ddH2O，5mL乙二醇，5mLDMSO。
3.利用权利要求1所述的冷冻保存液的超低温冷冻复苏的方法，其步骤包括：
（1）配制冷冻保存液：配置新鲜的超低温冷冻保存液，4℃冰箱中预冷；
（2）稀释精液：将新鲜泥鳅精液与冷冻保存液按照1:5-1:8的体积比混匀；
（3）分装：将稀释后的精液分装至冻存管；
（4）程序降温：将冻存管置于程序降温盒中，再一起移入-80℃冰箱中，停留4-6h；
（5）超低温保存：将冻存管放入液氮中长期保存；
（6）复苏：将冻存管置于25-32℃水浴中，轻轻摇动使温度均匀，待只剩少量固体时立即取出，在空气中继续摇动使其完全融化。
4.权利要求1所述的冷冻保存液在制备泥鳅精子超低温冷冻保存液制剂中的应用。
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