[发明专利]一种检测新型鸭呼肠孤病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用

权利要求书

1.一组引物和探针，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所示；所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.权利要求1所述的引物和探针在制备检测新型鸭呼肠孤病毒的试剂或试剂盒中的应用；所述新型鸭呼肠孤病毒的保藏编号为CCTCC NO：V201818。

3.一种检测新型鸭呼肠孤病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述荧光定量PCR试剂盒含有权利要求1所述的引物和探针。

4.根据权利要求3所述的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述荧光定量PCR试剂盒中还包括：标准品和荧光定量PCR反应试剂。

5.根据权利要求4所述的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述标准品由如下方法制备而成：

采用SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所示的引物扩增保藏编号为CCTCC NO：V201818的鸭呼肠孤病毒的基因组，得到扩增产物，将扩增产物连接到pMD18-T载体上，筛选阳性克隆并提取质粒DNA，即制备得到标准品。

6.根据权利要求4所述的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述荧光定量PCR反应试剂包括：One Step RT-PCR Buffer、TaKaRa Ex Taq HS、PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ和ROX参比染料。

7.一种检测新型鸭呼肠孤病毒的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂含有权利要求1所述的引物和探针；所述新型鸭呼肠孤病毒的保藏编号为CCTCC NO：V201818。

8.权利要求3-6任一项所述的荧光定量PCR试剂盒或权利要求7所述的检测试剂在如下(1)-(3)中任一种中的应用：

(1)对鸭感染新型呼肠孤病毒进行流行病学调查；

(2)对血液或血清制品中的新型鸭呼肠孤病毒污染进行监控；

(3)精确检测新型鸭呼肠孤病毒拷贝数，明确鸭呼肠孤病毒的感染进程。

9.一种利用权利要求3-6任一项所述的荧光定量PCR试剂盒检测新型鸭呼肠孤病毒的方法，包括如下步骤：

(1)将标准品进行梯度稀释，之后进行TaqMan荧光PCR反应，根据阳性标准品的浓度和Ct值，绘制荧光定量标准曲线；

(2)提取待测样品总RNA，进行TaqMan荧光PCR反应，收集待测样品荧光信号，对荧光信号进行数据处理，得到Ct值及扩增曲线，对待测样品进行定性和定量检测；

优选的，步骤(1)和步骤(2)中，TaqMan荧光PCR反应的程序为：

42℃5min；95℃10s；之后95℃5s，60℃34s，40个循环。

10.保藏编号为CCTCC NO：V201818的鸭呼肠孤病毒在制备检测导致鸭跗关节肿胀的鸭呼肠孤病毒的荧光定量PCR试剂盒中的应用。