[发明专利]一种用于检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量的特征肽及方法

说明书

本发明公开了一种用于检测牛乳品中A2β‑酪蛋白含量的特征肽及方法，该特征肽的氨基酸序列为IHPFAQTQSLVYPFPGPIPNSLPQNIPPLTQTPVVVPPFLQPEVMGVSK。本发明通过筛选特征肽，获取对应的内标肽，并采用液质联用技术，实现了牛乳品中A2β‑酪蛋白的定量，该方法具有较好的线性、灵敏度、回收率和精密度。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，尤其涉及一种用于检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量的特征肽及方法。

背景技术

牛β-酪蛋白是牛奶中的主要乳蛋白之一，约占鲜奶蛋白质的15％～25％。牛β-酪蛋白具有非常优秀的消化性和低过敏性，可以防止活性蛋白的变异，亦可以促进某些营养成分(如钙、磷、必需氨基酸等)的吸收。

β-酪蛋白由226个氨基酸残基组成，包含A1、A2、A3等多种变异体，其中A1、A2为最主要的变异体。A2β-酪蛋白是牛β-酪蛋白的天然原型。最初，所有家牛只含有A2类β-酪蛋白，后因基因突变出现了A1蛋白质的变体。A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白的结构存在差异，A1β-酪蛋白在67号位氨基酸上发生变异，由原来的羟脯氨酸P变异为组氨酸H。研究表明，A1β-酪蛋白在消化过程中可生成β-酪啡肽-7(BCM-7)，而A2β-酪蛋白则不会生成；然而BCM-7被部分研究认为可能是诱发糖尿病，影响免疫系统和心血管系统发育的因素。乳制品中高含量的A1对于婴幼儿早期的生长发育具有潜在的风险性。

申请公布号为CN101339158A的发明专利申请文献公开了一种利用毛细管电泳检测乳中β-酪蛋白含量的方法，该方法包括以下步骤：将需要检测的乳样品与样品缓冲液进行混合处理，将混合处理之后的样品通过毛细管电泳仪进行检测，所述样品缓冲液的配制方法是：三甲基氨基甲烷缓冲液加3-吗啉代丙烷磺酸、乙二胺四乙酸二钠、尿素，处理样品时再添加β-巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素。其中乳样品处理的步骤包括乳样品的离心处理，取离心处理后的样品上清液与样品缓冲液混合，再经超声波清洗。

申请公布号为CN106198692A的发明专利申请文献公开了一种检测牛乳中A1β-酪蛋白及A2β-酪蛋白的方法。该方法包括：(1)将待测样品依次进行加热、离心、冷冻及解冻，以便得到待测储备液；(2)将所述待测储备液进行预处理，以便得到待测液，其中，所述预处理包括将所述待测储备液与预处理液进行混合；以及(3)利用毛细管电泳法对所述待测液进行检测，以便确定牛乳中是否含有A1β-酪蛋白及A2β-酪蛋白。

目前，关于A2β-酪蛋白的检测方法仍然较为缺乏。因此，有必要建立一种可以精确定性定量A2β-酪蛋白的检测方法，该方法无论是对于食品安全方面还是对于市场监管领域都具有深远的意义。

发明内容

本发明提供了一种用于检测牛乳品中A2β-酪蛋白的含量特征肽以及利用该特征肽检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量的方法，该特征肽和方法能够准确检测乳品中A2β-酪蛋白的含量，具有较高的特异性、灵敏度、回收率和精密度。

具体技术方案如下：

一种用于检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量的特征肽，其氨基酸序列为IHPFAQTQSLVYPFPGPIPNSLPQNIPPLTQTPVVVPPFLQPEVMGVSK。

经检测，其他牛乳蛋白中均不含有与该肽段氨基酸序列一致的肽段。该特征肽经化学合成获得，而经化学合成、纯化后的产品纯度可以达到95％以上，在本发明中作为肽段标准品使用。本发明中所述的A2β-酪蛋白指牛A2β-酪蛋白。

基于上述特征肽，本发明又提供了一种用于检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量的内标肽，其氨基酸序列为IHPFAQTQS(L*)VYPFPGPIPNS(L*)PQNIPP(L*)TQTPVVVPPF(L*)QPEVMGVSK。该内标肽组合添加至待测样品中，起到对检测结果进行校正的目的。