[发明专利]一种用于检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量的特征肽及方法

权利要求书

1.一种用于检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量的特征肽，其特征在于，氨基酸序列为IHPFAQTQSLVYPFPGPIPNSLPQNIPPLTQTPVVVPPFLQPEVMGVSK。

2.一种用于检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量的内标肽，其特征在于，氨基酸序列为IHPFAQTQS(L*)VYPFPGPIPNS(L*)PQNIPP(L*)TQTPVVVPPF(L*)QPEVMGVSK。

3.一种液质联用检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量的试剂盒，其特征在于，包括A2β-酪蛋白特征肽和A2β-酪蛋白内标肽；所述A2β-酪蛋白特征肽的氨基酸序列为IHPFAQTQSLVYPFPGPIPNSLPQNIPPLTQTPVVVPPFLQPEVMGVSK，所述A2β-酪蛋白内标肽的氨基酸序列为IHPFAQTQS(L*)VYPFPGPIPNS(L*)PQNIPP(L*)TQTPVVVPPF(L*)QPEVMGVSK。

4.如权利要求3所述的试剂盒在检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量中的应用。

5.一种液质联用检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量的方法，其特征在于，采用方案A和方案B中的至少一种；

方案A：

(1)取待检测的样品，用水稀释，依次经变性处理、胰蛋白酶酶解处理、二甲基化处理后，终止反应，得到预处理后的样品溶液；

(2)取如权利要求1所述特征肽的标准品，依次经变性处理、胰蛋白酶酶解处理、二甲基化处理后，得到二甲基化的内标肽溶液；

(3)将所述的内标肽溶液加入至所述样品溶液中混合，得到待测样品；

(4)采用高效液相色谱-质谱联用技术对所述待测样品进行检测；

(5)根据检测结果，计算待测样品中如权利要求1所述的A2β-酪蛋白特征肽与其相对应的内标肽的峰面积比；

(6)将所述峰面积比代入标准曲线中，计算得到待测样品中A2β-酪蛋白特征肽的浓度，最后计算得到样品中A2β-酪蛋白的含量。

方案B：

(a)取待检测的样品，用水稀释，加入如权利要求2所述内标肽的标准品，依次经变性处理、胰蛋白酶酶解处理后，终止反应，得到待测样品；

(b)采用高效液相色谱-质谱联用技术对所述待测样品进行检测；

(c)根据检测结果，计算待测样品中如权利要求1所述的A2β-酪蛋白特征肽与其相对应的内标肽的峰面积比；

(d)将所述峰面积比代入标准曲线中，计算得到待测样品中A2β-酪蛋白特征肽的浓度，最后计算得到样品中A2β-酪蛋白的含量。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(4)和步骤(b)中，高效液相色谱的检测条件为：色谱柱：Acquity BEH 300 C18柱(1.7μm，2.1×100mm)；柱温：15℃；进样体积：10μL；样品温度：15℃；流动相A：0.1％甲酸-水，流动相B：0.1％甲酸-乙腈，流速为0.4mL/min。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(4)和步骤(b)中，质谱的条件为：电喷雾离子源电离模式：ESI⁺；质谱扫描方式：多反应监测(MRM)；毛细管电压：3.5kV；锥孔电压：30V；离子源温度：150℃；脱溶剂温度：500℃；脱溶剂气流量：800L/min；锥孔反吹气流量：50L/hr。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(6)中，所述标准曲线由以下方法获得：将特征肽配制成系列浓度的标准溶液，经步骤(2)得到内标肽溶液，再经高效液相色谱-质谱联用技术分析，计算得到各标准品中A2β-酪蛋白特征肽与其相对应的内标肽的峰面积，绘制得到标准曲线。

9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(d)中，所述标准曲线由以下方法获得：将特征肽组合配制成系列浓度的标准溶液，加入内标肽后经液相色谱串联质谱分析，计算得到各标准品中A2β-酪蛋白特征肽与相应的内标肽的峰面积，绘制得到标准曲线。